植物抗病蛋白定性分析

检测项目

蛋白质浓度测定：采用BCA法或Bradford法，定量范围0.5-30μg/mL，误差±5%

SDS-PAGE分子量分析：使用12%分离胶，电压恒定120V，分子量标准范围10-250kDa

Western Blot特异性验证：一抗孵育4℃过夜，HRP标记二抗1:5000稀释，ECL曝光时间30-180s

等电点测定：等电聚焦电泳pH梯度3-10，电压5000V，运行时间2h

圆二色谱二级结构分析：波长扫描范围190-260nm，分辨率0.5nm，温度控制25±0.1℃

质谱分子量精确测定：MALDI-TOF MS正离子模式，质量精度±0.01%

肽指纹图谱鉴定：Trypsin酶解37℃ 16h，LC-MS/MS梯度洗脱60min，数据库检索E值<0.01

磷酸化位点定位：TiO2富集磷酸化肽段，MS/MS碎裂能量28-35eV

糖基化修饰分析：凝集素芯片检测，荧光信号强度>5000AU判定阳性

蛋白互作验证：表面等离子共振技术，结合常数KD测定范围10-9-10-12M

活性氧生成能力：DCFH-DA荧光探针，激发波长488nm，定量单位nmol/min/mg

抗菌活性测定：抑菌圈法，菌液浓度1×10⁶CFU/mL，培养温度28℃

检测范围

转基因作物表达蛋白：水稻OsWRKY45、小麦TaPR1等重组抗病蛋白

病原相关分子模式受体：FLS2、EF-Tu受体等膜定位识别蛋白

核苷酸结合位点蛋白：NLR家族抗病蛋白如RPW8、RPS5

病程相关蛋白：几丁质酶Class III、β-1,3-葡聚糖酶PR2

植物凝集素类：GNA型甘露糖结合蛋白，分子量约12kDa

抗毒素合成酶：植保素关键合成酶PAL、4CL

转录调控因子：MYB、bZIP类DNA结合蛋白

活性氧代谢酶：SOD、CAT、POD等抗氧化酶系

病程相关信号蛋白：水杨酸通路蛋白NPR1、茉莉酸受体COI1

细胞壁修饰蛋白：扩展素Expansin-A1、木葡聚糖内转糖基酶XTH

病毒外壳蛋白互作体：eIF4E/eIF4G翻译起始因子复合物

分泌型抗真菌蛋白：RsAFP2防御素、脂质转移蛋白nsLTP

检测标准

ISO 21571:2005 分子生物学检测核酸与蛋白提取通则

GB/T 35809-2018 植物蛋白免疫印迹分析技术规范

ASTM E2756-19 圆二色光谱测量规程

GB/T 38164-2019 蛋白质质谱鉴定通用规则

ISO 20676:2018 表面等离子共振生物分子互作检测

GB/T 34798-2017 蛋白纯化色谱柱效能测试方法

ISO 10993-18:2020 生物材料蛋白吸附评估

GB/T 40219-2021 植物源抗菌蛋白活性测定

AOAC 991.48 食品蛋白质凯氏定氮法

GB 5009.5-2016 食品安全标准蛋白质测定

ISO 20483:2013 谷物与豆类氮含量测定

GB/T 35401-2017 蛋白质热稳定性差示扫描量热法

检测仪器

超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用系统：配备ESI离子源，质量精度≤2ppm，实现多肽序列从头解析

圆二色光谱仪：氙灯光源，温控精度±0.1℃，二级结构含量计算误差<5%

表面等离子共振生物传感器：多通道流动池，最小检测限0.1RU，动力学常数测定范围10²-10¹²M-1s-1

激光共聚焦显微镜：405/488/561/640nm四激光器，Z轴分辨率0.35μm，用于亚细胞定位分析

等温滴定量热仪：样品池容积1.4mL，最小可检测热功率0.1μW，结合常数测定范围102-108M-1

毛细管电泳系统：紫外/荧光双检测器，分离电压30kV，分辨率>200万塔板数/米

微量热泳动仪：红外激光加热，温度梯度0.1-5K/min，分子互作检测限1nM

全自动蛋白印迹系统：转膜电流恒定350mA，封闭-抗体孵育-显影全流程自动化

冷冻透射电子显微镜：场发射枪，点分辨率0.2nm，三维重构分辨率3-5Å

高通量蛋白纯化工作站：多柱位并行操作，最大压力40MPa，纯化通量50样本/日

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。