eb病毒dna检测

检测项目

EB病毒DNA定性检测：确定病毒DNA存在与否，参数：检出限50 copies/mL，灵敏度99%。

EB病毒DNA定量检测：测量病毒拷贝数，参数：范围10²-10⁸ copies/mL，精度±0.5 log单位。

扩增效率分析：评估PCR反应效率，参数：效率范围90%-110%，R²>0.98。

特异性验证：排除交叉反应，参数：针对EBV特异性序列，无其他病毒干扰。

灵敏度测试：测定最低检测限，参数：LOD 10 copies/mL，重复性CV<5%。

重复性分析：多次实验一致性，参数：变异系数CV≤5%，样本量≥3次。

线性范围验证：标准曲线线性评估，参数：动态范围10²-10⁷ copies/mL，R²≥0.99。

抑制物检测：识别样本中PCR抑制物，参数：内控阳性对照回收率>80%。

DNA提取效率评估：衡量核酸回收率，参数：提取回收率≥85%，纯度A260/A280=1.8-2.0。

交叉污染控制：防止假阳性结果，参数：阴性对照组无扩增信号，背景阈值<0.1。

扩增子大小确认：验证PCR产物长度，参数：目标片段大小100-200bp，凝胶分辨率1bp。

反应体系优化：调整试剂浓度，参数：引物浓度0.2-0.5μM，Mg²⁺浓度1.5-3.0mM。

内参基因校准：使用管家基因标准化，参数：内参如β-actin，拷贝数变异<10%。

稳定性测试：评估试剂储存稳定性，参数：-20℃保存期12个月，效能下降<5%。

阈值循环分析：Ct值测定，参数：Ct值范围15-35，荧光阈值自动设定。

检测范围

临床血清样本：用于诊断EB病毒相关传染性单核细胞增多症，样本量≥1mL。

全血样本：监测病毒载量在免疫缺陷患者中，适用离心分离血浆。

唾液样本：无创检测儿童或群体筛查，要求采集无菌拭子。

脑脊液样本：诊断神经系统并发症如脑炎，需低体积检测。

组织活检样本：病理分析淋巴瘤等疾病，需石蜡包埋DNA提取。

细胞培养上清液：病毒学研究病毒复制，应用于实验室培养。

疫苗研发样品：评估免疫原性和效力，包括灭活病毒测试。

移植后监测样本：器官移植患者病毒再激活监控，频率季度性。

流行病学调查样本：追踪社区传播，涉及大规模群体筛查。

儿科患者样本：儿童感染监控，针对高发年龄组。

免疫缺陷人群样本：高风险群体如HIV患者，强化定期检测。

环境样本：研究病毒环境传播，如水样或表面拭子。

动物模型样本：实验动物感染研究，适用于疫苗开发。

冷冻保存样本：长期存储样本复测，要求-80℃保存。

高通量筛查样本：大规模公共卫生项目，自动化处理需求。

检测标准

ISO/IEC 17025 通用实验室能力要求。

ISO 15189 医学实验室质量和能力专用要求。

GB/T 29790-2013 分子体外诊断试剂性能评价指南。

CLSI MM03-A2 分子诊断方法验证规范。

GB/T 27401-2008 实验室质量控制指南核酸检测部分。

ASTM E1873 核酸扩增技术标准测试方法。

ISO 20395 生物样品中核酸扩增技术要求。

GB/T 37871-2019 医学实验室核酸扩增检测通用要求。

ISO 22174 食品微生物分子检测通则间接应用。

YY/T 1246-2014 医用PCR分析仪行业标准。

ISO 22870 即时检测应用指南。

GB/T 19634-2005 实验室生物安全通用要求。

检测仪器

实时荧光定量PCR仪：基于TaqMan或SYBR Green技术，功能：实时监测DNA扩增曲线，定量病毒载量，支持多通道荧光检测。

自动化核酸提取仪：采用磁珠或柱式法，功能：高效纯化DNA样本，去除抑制物，确保提取回收率>90%。

凝胶电泳系统：包含电泳槽和成像设备，功能：分析PCR产物大小和特异性，验证扩增片段正确性。

微阵列扫描仪：基于荧光或化学发光，功能：高通量检测多靶点序列，应用于基因分型和突变分析。

数字PCR仪：运用微滴分割技术，功能：绝对定量病毒拷贝数，提升检测精度至单拷贝水平。

分光光度计：测量核酸浓度和纯度，功能：评估DNA样本A260/A280比值，确保无污染。

离心机：高速或超速型号，功能：分离样本组分如血浆，支持DNA提取前处理。

恒温金属浴：温度控制设备，功能：维持PCR反应温度稳定性，优化扩增效率。

生物安全柜：II级A2型，功能：提供无菌操作环境，防止样本交叉污染。

冰冻切片机：用于组织样本处理，功能：制备均质样本，辅助DNA提取完整性。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。