肠道病毒检测

检测项目

病毒分离培养：采用RD细胞系进行活病毒增殖，培养周期5-14天，阳性判定标准为CPE≥50%

实时荧光RT-PCR：检测灵敏度10³copies/mL，靶标基因为VP1/5'UTR区，扩增程序：95℃预变性5min，45循环(95℃ 15s, 60℃ 30s)

血清中和试验：使用标准免疫血清，中和效价测定范围1:8-1:1024，结果判读以100%抑制细胞病变为终点

抗原胶体金检测：侧向层析法检测粪便样本，最低检出限1.0ng/mL VP1蛋白，反应时间15min

全基因组测序：Illumina平台PE150测序，覆盖深度≥100X，组装完整度阈值98%

病毒载量测定：qPCR标准曲线R²>0.99，动态范围10¹-10⁸copies/μL，内参基因为β-actin

交叉反应验证：测试同源性>70%的20种肠道病毒亚型，非特异性结合率≤0.1%

热稳定性试验：56℃水浴处理30min，检测病毒存活率，灭活临界值≤0.01%

衣壳蛋白电泳：SDS-PAGE分离VP0-VP3，电压120V，考马斯亮蓝染色判定条带大小(VP1:32kDa)

免疫荧光鉴定：IFA法使用FITC标记抗体，阳性判定标准为≥3个荧光聚焦/视野(400×)

检测范围

临床粪便样本：急性胃肠炎患者排泄物检测，要求采集后2小时内冷藏运输

咽拭子标本：呼吸道感染病例采样，保存于病毒运输培养基(VTM)

水体环境监测：地表水及污水处理厂出水，富集方法采用超滤离心(100kDa膜)

食品污染溯源：贝类水产品消化腺组织，前处理需酶解+聚乙二醇沉淀

细胞培养物：RD、Hep-2等易感细胞系的质量控制检测

疫苗原液：灭活疫苗的半成品抗原含量测定

医疗废水：医疗机构排污口生物安全性评估

冷链运输品：进出口冷冻食品表面涂抹样本

胎盘组织：宫内感染病例的病理标本处理

生物制剂：干扰素等药品生产用细胞基质的病毒污染筛查

检测标准

ISO/TS 15216-1:2017 食物链病毒检测分子方法

WS 588-2018 手足口病诊断标准

GB/T 38505-2020 消毒剂病毒灭活效果评价方法

YY/T 1596-2017 手足口病病原体核酸检测试剂盒

ISO 10705-2:2000 水质噬斑法检测肠道病毒

EPA Method 1615 水体肠道病毒浓缩与检测

GB 19489-2008 实验室生物安全通用要求

CPMP/BWP/268/95 欧洲药典病毒验证指南

ASTM E1053-20 消毒剂抗病毒活性测试

WS/T 687-2020 病原微生物实验室生物安全标识

检测仪器

实时荧光定量PCR仪：执行TaqMan探针法核酸扩增，温控精度±0.2℃，支持多通道荧光采集

超速离心机：病毒颗粒富集操作，最大转速150,000×g，配置固定角转子

生物安全柜：样本前处理核心设备，符合NSF49标准，A2型二级防护

凝胶成像系统：PCR产物电泳分析，紫外透射波长302nm，分辨率400万像素

全自动核酸提取仪：磁珠法处理样本，通量96样本/批次，提取效率≥95%

酶标仪：ELISA法抗原检测，波长范围400-750nm，支持双光路检测

冷冻切片机：组织样本处理，切片厚度3-5μm，温控范围-35℃至-5℃

高通量测序仪：全基因组分析，单次运行产出600GB数据，读长2×150bp

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。