复制型慢病毒检测

检测项目

病毒滴度测定：采用TCID50法或qPCR法定量活性病毒颗粒，检测范围10^2~10^9 IU/mL，重复性CV≤15%

复制能力检测：通过标记基因 rescue 实验追踪病毒复制，灵敏度可检出0.1% RCL形成

载体基因组完整性：Southern blot分析全长载体比例，分辨率达200bp

包膜蛋白表达：流式细胞术检测VSV-G蛋白表达率，精度±2%

辅助病毒残留：qPCR检测gag/pol基因拷贝数，检测限≤10 copies/μg DNA

支原体污染：培养法与PCR法双验证，符合EP 2.6.7标准

内毒素水平：鲎试剂法测定，限值≤5 EU/kg体重

复制型慢病毒（RCL）筛查：S+/L-法培养28天，检测灵敏度1/10^8 VP

载体稳定性：-80℃加速老化试验，检测效价衰减率

宿主细胞DNA残留：探针杂交法检测，标准≤10ng/剂

病毒颗粒形态：透射电镜负染观察，分辨率0.34nm

载体拷贝数分布：ddPCR定量单细胞整合数，CV值≤8%

检测范围

基因治疗临床制剂：CAR-T细胞治疗用慢病毒载体终产品

干细胞改造载体：iPSC重编程用自失活型慢病毒

基因功能研究工具：可诱导表达型四环素调控载体

疫苗开发平台：HIV-1包膜蛋白嵌合型载体

眼科治疗载体：视网膜色素上皮靶向型慢病毒

神经疾病模型：Cre-loxP条件性表达系统载体

血液病治疗产品：β-珠蛋白基因治疗用载体

病毒包装细胞系：HEK293T/17悬浮驯化细胞

血清替代型培养基：无动物源成分的转染试剂体系

纯化填料验证：纤维素膜层析柱捕获效率测试

冻存保护剂：DMSO/蔗糖配方对病毒活性的影响

一次性生物反应器：载体生产用袋体浸出物检测

检测标准

USP<1047>基因治疗载体标准

EP 2.6.16病毒载体滴度测定

ISO 13022:2012医药载体安全性评价

FDA CBER指导原则2023.06

中国药典2020版三部生物制品分册

ICH Q5A(R2)病毒安全性评价

ISO 14644-1洁净室环境监控

GB/T 16886.7医疗器械生物学评价

ISO 11737-1灭菌生物负载测定

EP 2.6.14宿主细胞蛋白残留

GB/T 37871-2019基因治疗载体要求

ISO 21570分子生物学检测通则

检测仪器

Beckman CytoFLEX SRT流式细胞仪：配备405/488/638nm三激光器，实现多色报告基因同步检测

Applied Biosystems QuantStudio 12K Flex qPCR系统：支持高通量病毒滴度检测，动态范围10个数量级

PerkinElmer ChemiDoc MP成像系统：化学发光法检测Western blot条带，灵敏度达fg级

Malvern NanoSight NS300纳米颗粒跟踪仪：测定病毒粒径分布(60-200nm)，浓度范围10^7~10^9颗粒/mL

Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480质谱仪：辅助蛋白残留检测，分辨率240,000 FWHM

Zeiss Libra 120透射电镜：80kV加速电压观察病毒包膜完整性

Sartorius BIOSTAT STR生物反应器：50L规模培养细胞监控DO/pH波动

Agilent 1260 Infinity II HPLC：分析纯化柱洗脱峰纯度，UV检测波长280nm

Bio-Rad QX200微滴式数字PCR仪：绝对定量载体拷贝数，检测限0.001%

Beckman Coulter Vi-CELL XR细胞计数器：台盼蓝法检测细胞活率>95%

Molecular Devices SpectraMax i3x多功能酶标仪：荧光强度法检测报告基因表达

Eppendorf CryoCube 740冻干机：病毒冻干保护剂优化程序

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。