phv病毒分型检测

检测项目

病毒DNA提取纯度检测：采用紫外分光光度法，要求A260/A280比值1.8-2.0，DNA浓度≥5ng/μL

L1区基因扩增检测：PCR扩增效率≥95%，产物长度450bp，退火温度55±1℃

型别特异性探针杂交：设置16种亚型探针，杂交温度42℃，灵敏度阈值10³copies/mL

E6/E7致癌基因突变分析：Sanger测序覆盖率≥99%，分辨率1%低频变异

实时荧光定量PCR：TaqMan探针法，定量线性范围10²~10⁸copies/μL，R²>0.99

多重PCR分型检测：同步检测35种高危型，引物特异性≥98%，交叉反应率<0.1%

病毒载量精确测定：采用标准曲线法，检测下限50copies/reaction，CV值≤5%

甲基化水平检测：亚硫酸盐转化效率≥99%，CpG岛覆盖率98%

基因芯片分型：包含120个探针位点，杂交信号强度≥5000RFU

下一代测序分析：Illumina平台，测序深度100X，读长2×150bp

整合状态检测：E2/E6比值法，阈值>1.0判定为游离态

宿主细胞因子检测：IL-10、TNF-α等因子ELISA检测，灵敏度1pg/mL

检测范围

宫颈脱落细胞样本：采用液基细胞保存液，要求细胞总量>5000个

组织活检标本：石蜡包埋组织厚度4μm，肿瘤细胞占比>30%

血清/血浆样本：采集量≥2mL，-80℃储存，避免反复冻融

尿液样本：晨尿中段50mL，离心取沉淀物

口腔拭子：采样器在颊黏膜旋转10次，保存于专用运输培养基

生殖道分泌物：采用无菌拭子采集，4小时内送检

冷冻组织切片：厚度8μm，贴附于阳离子玻片

穿刺液标本：胸腔/腹腔积液，离心取细胞团块

精液样本：液化后取0.5mL，PBS缓冲液稀释

细胞培养上清：0.22μm过滤去除杂质，病毒滴度≥10⁴TCID50/mL

法医物证样本：包括毛发毛囊、皮屑等微量检材

疫苗原液：灭活疫苗病毒抗原含量检测

检测标准

ISO 15189:2012医学实验室质量和能力要求

ISO/IEC 17025:2017检测和校准实验室能力通用要求

GB/T 37871-2019核酸扩增法检测人乳头瘤病毒

WS/T 513-2017子宫颈癌筛查质量保证指南

YY/T 1596-2017人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒

CLSI MM06-A2核酸测序方法验证指南

ASTM E1873-2006核酸扩增检测标准实施规程

EN 15223体外诊断医疗器械标识要求

GB 19489实验室生物安全通用要求

ISO 13485医疗器械质量管理体系

检测仪器

全自动核酸提取仪：磁珠法提取，通量96样本/批次，提取效率>95%

实时荧光PCR仪：六通道荧光检测，温控精度±0.1℃，支持熔解曲线分析

基因测序仪：毛细管电泳平台，分辨率1bp，最大读长1000bp

微阵列芯片扫描仪：激光共聚焦系统，分辨率5μm，动态范围10⁴

超微量分光光度计：检测体积0.5μL，波长范围190-840nm

生物分析仪：微流控芯片技术，核酸片段分析精度±5bp

超低温离心机：最大RCF 20000×g，温控范围-20℃至40℃

生物安全柜：A2型，气流流速0.38±0.025m/s

恒温金属浴：控温范围4-99℃，温度均匀性±0.3℃

自动化移液工作站：移液精度CV≤1%，支持96/384孔板操作

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。