巨细胞病毒dna定性检测

检测项目

检测下限：定义为可可靠检出的最低DNA浓度，参数为10 copies/mL

特异性分析：评估对其他病原体如EBV或HSV的交叉反应性，交叉反应率<1%

线性范围：DNA浓度在50-50000 copies/mL内线性相关系数>0.99

重复性测试：批内变异系数CV<5%，批间CV<10%

准确性验证：使用国际参考物质比对，符合率>95%

样本稳定性：在不同温度条件下（-20°C至室温）储存时效评估，降解率<10%/24h

核酸提取效率：回收率测定>80%，使用标准曲线校准

PCR扩增条件：优化退火温度55-65°C，循环数35-40 cycles

阳性对照设置：包含已知CMV DNA阳性样本，浓度1000 copies/mL

阴性对照设置：不含有CMV DNA的缓冲液样本，假阳性率<1%

抑制物耐受性：对血红蛋白或肝素等常见抑制物的耐受浓度>5 mg/mL

检测时间窗口：从样本处理到结果报告耗时<4小时

质控品使用：内置内标基因如β-actin，扩增Ct值范围18-22

结果判读标准：荧光阈值设定ΔRn>0.2，阳性判定Ct值<40

检测范围

全血样本：适用于外周血CMV DNA筛查，简介为常见临床应用样本

血浆样本：离心后获取，减少细胞干扰，用于定量监测

尿液样本：非侵入性检测选项，适用于儿童或长期监测

组织活检：取自肝脏或肺组织，用于局部感染诊断

脑脊液：中枢神经系统感染检测关键样本

支气管肺泡灌洗液：呼吸道相关CMV感染诊断

羊水：孕妇产前筛查先天性感染

器官移植受者监测：术后免疫抑制患者定期随访

HIV感染者管理：作为机会性感染风险评估

新生儿筛查：早期诊断先天性CMV综合征

孕期监测：预防母婴传播风险

实体瘤患者：化疗后免疫状态监测

骨髓移植后：预防病毒再激活

重症监护单元：快速感染诊断应用

检测标准

ISO 15189:2012 医学实验室质量和能力要求

GB/T 37878-2019 核酸扩增检测方法通则

CLSI EP12-A2 定性检测性能评价指南

WHO 巨细胞病毒诊断技术指南

ASTM E2882 分子诊断方法验证标准

GB/T 26124-2010 临床实验室检测质量控制规范

ISO 17025:2017 检测校准实验室通用要求

GB/T 27401-2008 实验室能力验证提供者要求

CLSI MM03-A2 分子检测方法验证协议

ISO 10993-17 医疗器械生物相容性测试相关标准

检测仪器

实时荧光定量PCR仪：实现CMV DNA的特异性扩增和实时监测，功能包括热循环控制和荧光信号采集

自动化核酸提取系统：高效分离纯化样本DNA，功能为高通量处理减少人为误差

微量分光光度计：测量DNA浓度和纯度，功能确保A260/A280比值在1.8-2.0范围内

高速冷冻离心机：样本预处理分离血浆或细胞组分，功能为10,000 rpm离心力处理

生物安全柜：提供无菌操作环境，功能防止样本交叉污染

恒温混匀仪：试剂混合均匀化，功能维持37°C恒温孵育

微量移液器系统：精确加样体积控制，功能精度±1% for 1-1000 μL范围

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。