第三代转录组测序检测

检测项目

RNA完整性评估：通过RIN值定量分析，检测范围1-10，分辨率0.1，要求样本RIN≥7.0

全长cDNA构建：检测反转录效率，产物长度范围500bp-10kbp，双链合成纯度OD260/280=1.8-2.0

文库片段筛选：磁珠分选目标片段，选择区间1.5-6kb，峰宽CV值≤15%

测序深度控制：依据转录本复杂度设定，标准深度10-20Gb，基因覆盖度≥90%

嵌合体识别：采用BLAT算法比对，错误连接检出限0.01%

异构体定量：ISO-seq分析流程，亚型分辨精度±5%

低频变异检测：SNP检出灵敏度0.1%，测序质量值Q30≥90%

融合基因验证：支持断点定位，定位精度±5bp

表达量校准：TPM标准化处理，批次间RSD≤10%

多聚腺苷酸化位点鉴定：识别polyA信号ATTAAA，定位误差≤3nt

检测范围

人类临床样本：肿瘤组织FFPE切片，检测RNA降解程度

植物胁迫响应材料：盐胁迫根系，解析可变剪接事件

微生物宏转录组：环境样本滤膜，检测活性功能基因

模式动物发育组织：斑马鱼胚胎，追踪时空表达谱

稀有细胞群体：循环肿瘤细胞，最低起始量10ng RNA

病毒准种分析：HIV包膜基因，检测低频突变株

古生物样本：猛犸象化石，处理高度降解RNA

药用植物次级代谢：长春花萜类合成通路，全长转录本重建

昆虫抗性机制：棉铃虫Bt毒素受体，检测选择性剪接

海洋生物共生体系：珊瑚-虫黄藻互作，跨物种转录组解析

检测标准

ISO 20395:2019 生物技术核酸定量要求

GB/T 37872-2019 高通量测序数据质量评价

ISO/IEC 17025 检测实验室通用要求

GB/T 34796-2017 核酸浓缩物纯度检测

EN ISO 18113 体外诊断试剂标签说明

GB/T 30988 多酚氧化酶活性测定方法

ISO 20184 微量样本RNA提取规范

GB/T 38578-2020 转录组测序数据存储格式

检测仪器

PacBio Sequel IIe测序系统：搭载SMRT Cell 8M芯片，单分子实时测序，读长平均20kb

Agilent 4200 TapeStation：微流控电泳平台，执行RNA完整性检测，RIN值分辨率0.1

Covaris g-TUBE：机械剪切装置，控制DNA片段化，片段大小偏差±5%

Qubit 4.0荧光计：高灵敏度核酸定量，检测下限0.5pg/μL RNA

BluePippin分选系统：脉冲场电泳筛选，文库片段选择精度±50bp

Nanopore PromethION：纳米孔测序仪，直接RNA测序，支持碱基修饰检测

Beckman Coulter Biomek i7：自动化移液工作站，实现96孔板平行建库

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。