马传染性贫血病ELISA检测

检测项目

血清样本采集：收集马血液样本；参数：采血量5ml，使用真空采血管，抗凝剂类型EDTA。

血清分离：离心分离血清成分；参数：离心速度3000rpm，时间10分钟，温度4°C。

抗原包被：固定EIA抗原于微孔板；参数：抗原浓度10μg/ml，包被时间12小时，温度4°C。

血清稀释：稀释血清样本；参数：稀释比例1:40，使用PBS缓冲液pH7.4。

血清孵育：添加稀释血清至微孔板；参数：孵育时间30分钟，温度37°C。

洗涤步骤：去除未结合物质；参数：洗涤次数3次，每次浸泡5分钟，缓冲液体积200μl。

酶标抗体添加：添加酶标记二抗；参数：抗体浓度1:1000，孵育时间30分钟，温度37°C。

底物添加：加入显色底物；参数：底物类型TMB，反应时间10分钟，避光条件。

终止反应：停止酶促反应；参数：终止液2M H₂SO₄，添加量50μl。

吸光度测量：测量颜色强度；参数：波长450nm，参考波长630nm，光密度范围0-3.0。

结果判读：根据吸光度值判定结果；参数：阳性阈值OD值>0.5，阴性<0.2，灰区0.2-0.5。

质量控制：包括对照样本；参数：阴性对照OD值<0.1，阳性对照>0.8。

数据记录：记录检测数据；参数：样本ID编号，检测日期，操作员信息。

报告生成：生成最终检测报告；参数：报告格式PDF，包含结果摘要和参考范围。

检测范围

临床诊断样本：用于诊断疑似感染马匹的血清检测。

健康监测样本：用于定期马群健康筛查的血清分析。

种马场管理：在育种场监测种马健康状况的应用。

赛马场检疫：在赛马场进行入场前马匹检疫。

进出口检疫：在海关检疫马匹的血清检测程序。

马肉加工监测：监测肉用马屠宰前的健康状态。

生物制品检测：检测马用血清制品或疫苗的污染。

运输前检查：确保运输马匹健康的血清筛查。

流行病学调查：研究马群EIA疫情传播的样本分析。

免疫研究：研究马匹对EIA病毒的免疫反应机制。

动物福利评估：评估马匹健康状态的血清测试。

保护区管理：用于野生马种群保护的监测程序。

检测标准

OIE Terrestrial Manual Chapter 3.5.1: Equine Infectious Anemia.

GB/T 18642-2002 马传染性贫血病诊断技术.

USDA APHIS Veterinary Services Guidelines for EIA Testing.

ISO 15189:2012 Medical laboratories — Requirements for quality and competence.

ASTM E2520-15 Standard Test Method for Conducting Equine Infectious Anemia Tests.

GB/T 27401-2008 实验室质量控制规范.

OIE Code Chapter 11.5 Equine Infectious Anemia.

ISO/IEC 17025:2017 General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.

GB/T 19915.5-2005 动物疫病诊断技术规程.

ASTM D4456-99 Standard Practice for Handling of High Purity Water Samples.

检测仪器

酶标仪：测量微孔板吸光度；在本检测中读取ELISA反应的光密度值，波长范围400-700nm。

自动洗板机：自动洗涤微孔板孔位；在本检测中执行洗涤步骤，确保去除未结合物质。

微量移液器：精确加样微量液体；在本检测中添加血清样本和试剂，精度0.1μl。

恒温孵育箱：控制温度环境；在本检测中维持孵育温度，范围20-40°C。

离心机：分离血液成分；在本检测中制备血清样本，转速范围1000-5000rpm。

振荡器：混合反应混合物；在本检测中确保试剂均匀分布，转速可调。

冰箱：储存敏感试剂；在本检测中保存抗原和抗体，温度范围2-8°C。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。