烯丙孕素检测

检测项目

定性检测：通过色谱-质谱联用技术识别样品中烯丙孕素的特征离子，确认目标化合物存在。特征离子匹配度≥90%（按ISO 17025要求）。

定量检测：采用外标法或内标法测定样品中烯丙孕素的准确含量。定量线性范围0.01~10μg/kg（基质匹配标准曲线）。

残留限量检测：验证样品中烯丙孕素含量是否符合国家或国际规定的最大残留限量（MRL）。MRL符合GB 31650-2019或欧盟EC 37/2010法规要求。

基质效应评估：评估样品基质对烯丙孕素检测信号的增强或抑制作用。基质效应因子（ME）范围80%~120%（可接受范围）。

回收率测定：计算加标样品中烯丙孕素的回收比例，反映方法的准确性。回收率85%~115%（RSD≤10%，n=6）。

精密度分析：包括日内精密度和日间精密度，评估方法的重复性。日内RSD≤8%，日间RSD≤12%（n=5）。

稳定性试验：考察烯丙孕素在样品存储、处理及检测过程中的稳定性。冻融稳定性（-20℃反复冻融3次，含量变化≤5%）；室温稳定性（25℃放置24小时，含量变化≤3%）。

交叉反应性测试：检测方法对烯丙孕素类似物（如孕酮、甲羟孕酮）的识别能力。交叉反应率≤5%（针对结构类似化合物）。

代谢物检测：分析烯丙孕素在动物体内的主要代谢产物（如烯丙孕素葡萄糖醛酸苷）。代谢物分离度≥1.5（色谱峰分离要求）。

最低检测限（LOD）测定：基于信噪比（S/N=3）确定方法能检测到的最低浓度。LOD≤0.005μg/kg（猪肉基质）。

最低定量限（LOQ）测定：基于信噪比（S/N=10）确定方法能准确定量的最低浓度。LOQ≤0.01μg/kg（牛奶基质）。

样品前处理效率评估：考察提取、净化步骤对烯丙孕素的富集效果。提取回收率≥80%（固相萃取柱净化）。

杂质轮廓分析：识别烯丙孕素原料药中的工艺杂质（如合成副产物、降解产物）。杂质含量≤0.1%（单杂质）、≤0.5%（总杂质）（按ICH Q3A要求）。

检测范围

兽药原料：烯丙孕素原料药的纯度及杂质检测，确保原料符合药用标准。

兽药制剂：含烯丙孕素的兽药产品（如口服液、注射液）的含量均匀度及稳定性检测。

饲料添加剂：饲料中添加的烯丙孕素预混料的含量测定及分散性评估。

动物组织：猪肉、牛肉等动物肌肉组织中烯丙孕素残留量检测，符合食品安全标准。

乳制品：牛奶、奶粉等乳制品中烯丙孕素污染的筛查与定量。

动物尿液：动物尿液中烯丙孕素及其代谢物的监测，用于药物代谢研究。

动物粪便：养殖场粪便中烯丙孕素残留的检测，评估环境排放风险。

饲料原料：玉米、豆粕等饲料原料中烯丙孕素的意外污染检测。

兽药中间产品：烯丙孕素生产过程中中间体（如合成前体）的质量控制，确保工艺一致性。

环境样品：养殖场废水、土壤中烯丙孕素的残留检测，评估环境影响。

宠物食品：宠物食品中烯丙孕素的添加合规性检测，确保宠物食用安全。

进出口食品：进出口肉类、乳制品中烯丙孕素残留的通关检测，符合目标市场法规要求。

检测标准

GB 31650-2019《食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量》：规定了烯丙孕素在动物食品中的最大残留限量（如猪肉中0.5μg/kg）。

ISO 17025:2017《检测和校准实验室能力的通用要求》：指导烯丙孕素检测实验室的质量体系建立与运行。

EC 37/2010《欧盟委员会关于动物源食品中兽药残留的法规》：规范烯丙孕素在欧盟市场的残留限量（如牛奶中0.1μg/kg）及检测方法。

GB/T 22967-2008《牛奶和奶粉中孕激素类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》：适用于乳制品中烯丙孕素的定性定量检测。

AOAC Official Method 2008.05《动物组织中孕激素残留的测定 液相色谱-串联质谱法》：国际认可的烯丙孕素残留检测方法，用于动物组织样品分析。

GB/T 34796-2017《饲料中烯丙孕素的测定 液相色谱-串联质谱法》：饲料中烯丙孕素的标准检测方法，规定了样品前处理及仪器条件。

FDA 21 CFR Part 556《兽药残留限量》：美国市场中烯丙孕素的残留限量（如牛肉中0.5μg/kg）及检测要求。

SN/T 4537-2016《进出口动物源食品中孕激素类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》：进出口食品中烯丙孕素的检测标准，适用于通关检验。

ISO 21570:2005《食品中兽药残留分析 液相色谱-串联质谱法的一般要求》：烯丙孕素检测的色谱-质谱方法通用规范，包括方法验证要求。

GB 13078-2017《饲料卫生标准》：饲料中烯丙孕素的允许添加量（如育肥猪饲料中≤10mg/kg）及残留限量要求。

ICH Q3A(R2)《原料药中的杂质》：烯丙孕素原料药杂质分析的指导原则，规定了杂质的分类与控制策略。

检测仪器

液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）：结合液相色谱的分离能力和串联质谱的高灵敏度，用于烯丙孕素的定性定量检测。实现目标化合物的色谱分离（柱温30℃，流动相为乙腈-0.1%甲酸水梯度洗脱），通过多反应监测（MRM）模式检测特征离子（母离子327.2[M+H]+，子离子159.1、245.1），检出限≤0.005μg/kg，定量限≤0.01μg/kg。

高效液相色谱仪（HPLC）：配备紫外检测器（UV），用于烯丙孕素的定量分析。采用C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为甲醇-水（70:30），流速1.0mL/min，检测波长240nm，定量线性范围0.01~10μg/mL，精密度RSD≤5%。

固相萃取仪（SPE）：用于样品前处理中的基质净化，去除蛋白质、脂肪等干扰物。采用Oasis HLB固相萃取柱（60mg/3mL），依次用甲醇（3mL）、水（3mL）活化，样品加载后用5%甲醇水溶液（3mL）洗涤，最后用乙腈（3mL）洗脱，浓缩后用于LC-MS/MS分析，回收率≥85%。

氮吹仪：用于样品提取液的浓缩，去除有机溶剂。采用水浴加热（40℃），氮气流量5~10L/min，将10mL洗脱液浓缩至0.5mL，确保目标化合物无损失（回收率≥95%）。

高速离心机：用于样品前处理中的固液分离。转速8000rpm，离心时间10min，分离样品中的固体杂质，获得澄清 supernatant 用于后续分析。

电子天平：用于标准品及样品的称量。精度0.01mg，称量范围0~200g，确保标准溶液配制的准确性（如称取0.1000g烯丙孕素标准品，用甲醇溶解并定容至100mL，得到1000μg/mL储备液）。

涡旋混合器：用于样品与提取溶剂的充分混合。转速0~3000rpm，混合时间1~5min，确保烯丙孕素从基质中充分释放（如将5g猪肉样品与20mL乙腈混合，涡旋3min，提取率≥90%）。

超纯水机：制备实验用超纯水，用于流动相配制及样品稀释。出水电阻率≥18.2MΩ·cm（25℃），总有机碳（TOC）≤10ppb，避免对检测结果的干扰。

恒温培养箱：用于样品稳定性试验中的温度控制。温度范围4~60℃，精度±1℃，用于考察烯丙孕素在室温（25℃）、冷藏（4℃）或加速条件（40℃/75%RH）下的稳定性（含量变化≤5%）。

移液器：用于准确移取标准溶液或样品溶液。量程10~1000μL，精度±1%，确保标准曲线配制及样品稀释的准确性（如移取10μL 1000μg/mL储备液至100mL容量瓶，得到10μg/mL中间溶液）。

高效液相色谱-二极管阵列检测器（HPLC-DAD）：用于烯丙孕素原料药的杂质轮廓分析。采用C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸水梯度洗脱，检测波长240nm，识别并定量工艺杂质（如保留时间为12.5min的合成副产物），杂质含量≤0.1%（单杂质）。

检测流程

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获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。