连续传代诱导耐药性试验检测

检测项目

耐药菌最低抑菌浓度（MIC）动态监测：监测连续传代过程中微生物对目标药物的最低抑菌浓度变化，检测范围0.015~512μg/mL，重复性误差≤5%

耐药表型稳定性评估：评估耐药菌在无药物压力下传代后的耐药表型保持能力，传代次数≥10代，耐药表型保持率≥90%为稳定

耐药基因突变频率分析：检测连续传代过程中目标耐药基因的突变频率，突变频率计算方法为耐药菌落数/总菌落数，检测下限1×10⁻⁶

药物敏感性下降速率测定：计算每代MIC上升的倍数以反映耐药性产生快慢，速率单位为倍/代，数据采集间隔为每2代检测1次

交叉耐药性谱分析：检测耐药菌对同类或不同类其他抗菌药物的敏感性变化，检测药物种类≥5种，采用肉汤稀释法测定MIC

生物膜形成能力变化检测：评估耐药菌在传代过程中生物膜形成能力的改变，采用结晶紫染色法，OD570nm吸光度检测，cutoff值≥0.2为生物膜阳性

耐药菌生长速率测定：监测耐药菌在药物压力下的生长曲线变化，采用酶标仪实时监测，检测间隔15min，持续时间≥24h

药物外排泵活性检测：检测耐药菌通过外排泵排出药物的活性变化，采用荧光底物法，荧光强度变化率≥10%为活性阳性

耐药质粒水平转移能力测定：检测耐药菌通过质粒转移将耐药性传递给敏感菌的能力，转移频率计算方法为受体菌耐药菌落数/供体菌总菌落数，检测下限1×10⁻⁸

抗菌药物联合耐药性评估：评估耐药菌对两种或以上抗菌药物联合使用的敏感性变化，计算联合用药指数（FIC），FIC≤0.5为协同作用，0.52为拮抗作用

耐药菌代谢表型变化分析：检测耐药菌在连续传代过程中代谢产物的变化，采用液相色谱-质谱联用技术，代谢物鉴定数量≥50种，差异代谢物筛选阈值为fold change≥2且P<0.05

耐药菌细胞壁/细胞膜通透性检测：评估耐药菌细胞壁或细胞膜对药物的通透性变化，采用荧光素钠渗透法，荧光强度增加率≥20%为通透性升高

检测范围

抗菌药物研发样品：包括新型合成抗菌药物、天然产物提取物、生物制品（如抗菌肽）等，用于评估药物诱导微生物耐药的潜力

临床分离耐药菌：如医院感染的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）、耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌（CRE）等，用于研究临床耐药菌的耐药机制及稳定性

畜牧兽医用抗菌药物：包括兽用抗生素、抗菌饲料添加剂等，用于评估畜牧生产中抗菌药物诱导动物源微生物耐药的风险

环境来源微生物：如污水处理厂、养殖场周边环境中的微生物，用于研究环境中抗菌药物残留诱导微生物耐药的情况

食品加工用抗菌剂：如食品防腐剂、抗菌包装材料等，用于评估食品加工过程中抗菌剂诱导食品源微生物耐药的能力

农业用抗菌药物：包括农用抗生素、杀菌剂等，用于研究农业生产中抗菌药物诱导植物病原微生物耐药的动态变化

生物医药材料：如抗菌涂层植入物、抗菌敷料等，用于评估生物医药材料中抗菌成分诱导微生物耐药的可能性

水产养殖用抗菌药物：包括水产用抗生素、抗菌渔药等，用于评估水产养殖中抗菌药物诱导水生微生物耐药的风险

实验室标准菌株：如ATCC标准菌株（大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC29213）等，用于建立耐药性诱导试验的标准化模型

中药抗菌提取物：如黄连提取物、金银花提取物等，用于评估中药成分诱导微生物耐药的潜力及机制

消毒剂与防腐剂：如含氯消毒剂、季铵盐类防腐剂等，用于研究消毒剂诱导微生物耐药的情况及交叉耐药风险

检测标准

ASTM E2647-13(2020)《连续传代诱导微生物耐药性试验标准指南》：规定了连续传代诱导耐药性试验的设计、操作及结果分析方法

ISO 20776-1:2019《临床实验室检测细菌对抗菌药物敏感性的方法 第1部分：纸片扩散法》：用于检测耐药菌的药物敏感性

GB/T 38469-2020《抗菌药物体外药效学研究技术指导原则》：指导抗菌药物药效学研究，包括耐药性诱导试验

CLSI M100-Ed33《抗菌药物敏感性试验执行标准》：提供抗菌药物敏感性试验的标准化操作流程及结果解释标准

ISO 10932:2010《微生物学 抗菌药物敏感性试验 肉汤稀释法》：用于测定微生物对抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）

ASTM E3161-18《微生物耐药性基因检测的标准指南》：用于检测耐药基因的突变

ISO 22717:2015《化妆品 微生物学 抗菌防腐剂有效性测试》：用于化妆品中抗菌防腐剂的耐药性诱导试验

GB/T 20923-2007《渔用抗菌药物药效试验技术规范》：用于渔用抗菌药物的药效及耐药性试验

CLSI M23-Ed3《细菌耐药性检测的质量控制标准》：用于耐药性检测的质量控制

GB/T 21703-2008《兽用抗菌药物体内药效试验技术规范》：用于兽用抗菌药物的体内药效及耐药性试验

检测仪器

自动微生物培养系统：用于连续传代过程中微生物的自动化培养，可控制温度、湿度、气体环境等条件，支持多通道同时培养，培养温度范围20~45℃，湿度控制范围30%~90%，气体环境（如CO₂、O₂）调节精度±1%

药物敏感性检测仪：用于检测微生物对药物的敏感性，测定最低抑菌浓度（MIC），检测范围0.015~512μg/mL，支持broth microdilution法，每板可检测≥96个样本，重复性误差≤5%

实时荧光定量PCR仪：用于检测连续传代过程中耐药基因的突变及表达量变化，检测灵敏度≤10 copies/μL，支持多重PCR反应，荧光通道≥4个，扩增效率90%~110%

微生物表型分析仪：用于评估耐药菌的表型变化（如生长速率、代谢活性等），检测孔数≥384孔，支持连续监测72小时，生长速率计算精度±0.01 OD/h

高效液相色谱-质谱联用仪（HPLC-MS/MS）：用于分析耐药菌代谢产物的变化以揭示耐药机制，色谱柱规格C18（2.1×100mm，1.7μm），质谱分辨率≥10000 FWHM，检出限≤0.1 ng/mL

流式细胞仪：用于检测耐药菌的细胞膜通透性、凋亡率等表型特征，检测通道≥4个，流速≥1000 cells/sec，分辨率≤2% CV

基因测序仪：用于测定耐药菌的全基因组序列以分析耐药基因的突变位点，测序读长≥150 bp，覆盖深度≥50×，准确率≥99.9%

生物膜定量分析仪：用于检测耐药菌生物膜的形成能力，采用结晶紫染色法，检测波长570nm，吸光度范围0~4 OD，重复性误差≤3%

外排泵活性检测仪：用于评估耐药菌外排泵的活性，采用荧光底物（如罗丹明6G），荧光强度检测范围0~10000 AU，活性计算精度±5%

菌落计数仪：用于连续传代过程中微生物菌落的自动计数，计数范围1~1000 CFU/平板，准确率≥95%，支持黑白平板识别

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。