核酸杂交验证检测

检测项目

目标核酸序列特异性验证：通过标记探针与目标核酸的杂交反应，验证序列的唯一性，检测参数：杂交特异性≥99%，交叉反应率≤1%

探针标记效率检测：测定荧光、生物素等标记物与探针的结合率，检测参数：标记效率≥85%，未标记探针残留≤5%

杂交反应动力学分析：监测杂交反应的速率及平衡时间，检测参数：反应速率常数1.2×10⁻³~5.0×10⁻³ L/(mol·s)，平衡时间≤60分钟

目标核酸最低检测限测定：确定检测方法能检出的最小目标核酸浓度，检测参数：DNA最低检测限≤10 copies/μL，RNA最低检测限≤50 copies/μL

杂交信号强度定量：对杂交后的荧光、化学发光信号进行定量分析，检测参数：信号线性范围10~10⁶ copies/μL，定量误差≤10%

核酸片段大小验证：通过电泳或芯片分析杂交后的核酸片段，验证长度准确性，检测参数：电泳法分辨率≤5bp，芯片法分辨率≤1bp

等位基因特异性杂交检测：验证目标基因的等位基因变异（如SNP），检测参数：等位基因鉴别率≥99.5%，假阳性率≤0.5%

生物制品残余宿主核酸检测：检测疫苗、重组蛋白中的宿主细胞核酸残留，检测参数：残余量≤10ng/剂（按制品类型调整），灵敏度≤1pg/μL

病毒核酸定性验证：确认临床样本中特定病毒核酸（如新冠病毒、乙肝病毒）的存在，检测参数：临床样本检出率≥95%，特异性≥99%

基因表达水平验证：通过Northern blot、原位杂交验证基因转录水平，检测参数：表达量差异倍数≥2倍（统计学显著），重复性变异系数≤15%

转基因作物外源基因验证：检测抗虫棉、转基因玉米中的外源基因片段（如Cry1Ab、EPSPS），检测参数：外源基因检出限≤0.1%（基因组DNA含量）

检测范围

临床诊断样本：血清、血浆、咽拭子等临床样本中的病原核酸（病毒、细菌）检测

生物制品：疫苗（新冠疫苗、乙肝疫苗）、重组蛋白药物中的宿主核酸残留及目的基因验证

基因工程产品：重组质粒、慢病毒载体中的目的序列准确性验证

农作物转基因检测：转基因作物中的外源基因片段（如Cry1Ab、EPSPS）验证

动物疫病检测：动物组织中的非洲猪瘟病毒、禽流感病毒核酸检测

环境微生物监测：水体、土壤中的大肠杆菌、蓝藻核酸序列验证

法医物证鉴定：血痕、精斑中的人类基因组核酸片段验证

药物基因组学研究：患者基因组中的CYP2D6、VKORC1等位基因变异验证

食品转基因成分检测：转基因大豆、玉米中的外源基因片段验证

分子生物学研究：实验室克隆的基因片段、突变体文库中的序列准确性验证

检测标准

GB/T 19495.5-2004 转基因产品检测 核酸杂交法

ISO 22174:2005 食品中转基因生物及其产品的检测 核酸杂交法

ASTM E2107-05(2019) 核酸杂交检测基因表达的标准指南

GB/T 35537-2017 生物制品中残余宿主细胞DNA检测 杂交法

ISO 15239:2003 农产品中转基因生物检测 核酸杂交法

GB/T 22287-2008 动物源性饲料中哺乳动物源性成分检测 核酸杂交法

ASTM E1681-95(2020) 核酸探针杂交检测微生物的标准实践

GB/T 18654.10-2008 养殖鱼类种质检验 第10部分：核酸杂交法检测

ISO 21571:2005 食品中致病菌检测 核酸杂交法

GB/T 38477-2020 病毒核酸检测 杂交法

检测仪器

核酸杂交仪（Model HYB-2000）：具备40~95℃温度梯度（步长0.1℃），支持多通道同时杂交，用于探针与目标核酸的变性、退火反应

荧光显微镜（Model FM-5000）：配备1600×1200分辨率CCD摄像头，激发波长覆盖405nm、488nm、555nm，用于观察原位杂交荧光信号

实时荧光定量PCR仪（Model QPCR-8000）：支持SYBR Green、TaqMan探针检测，灵敏度≤10 copies/μL，用于杂交后目标核酸定量验证

基因芯片扫描仪（Model Scanner-6000）：扫描分辨率≤5μm，动态范围≥3.5个数量级，用于读取基因芯片杂交信号强度

核酸电泳系统（Model Electrophoresis-3000）：稳压0~300V、稳流0~500mA，用于分离杂交后核酸片段并验证大小

紫外分光光度计（Model UV-2000）：波长200~800nm，吸光度精度≤±0.002A，用于测定杂交前核酸浓度和纯度

杂交炉（Model Oven-4000）：40~80℃温度均匀性≤±0.5℃，支持滚动式杂交，用于保持杂交反应温度稳定性

洗膜仪（Model Washer-1000）：具备自动液体更换功能，支持不同浓度洗膜液，用于去除未结合探针以提高特异性

化学发光成像系统（Model Chemiluminescence-5000）：检测灵敏度≤1pg，动态范围≥4个数量级，用于检测化学发光标记探针杂交信号

低温离心机（Model Centrifuge-7000）：最大转速15000rpm、相对离心力21000×g，用于杂交前核酸样本分离纯化

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。