成脂相关miRNA测序检测检测

检测项目

成脂相关miRNA表达谱测序：对脂肪细胞分化不同阶段的miRNA进行高通量测序，获取全基因组miRNA表达信息；测序深度≥10Mreads/sample，碱基质量Q30≥90%，文库片段大小18~30nt。

差异表达miRNA筛选：比较不同样本组（如分化组与未分化组、正常与肥胖模型组）miRNA表达水平，筛选差异显著的miRNA；筛选标准为foldchange≥2或≤0.5，P值≤0.05，FDR≤0.01，支持生物学重复（≥3次）验证。

miRNA靶基因预测：利用TargetScan、miRanda、PITA三种算法交集预测差异miRNA的靶基因，减少假阳性；靶基因数量≥50个/miRNA，预测结果需包含靶位点结合能（≤-20kcal/mol）。

靶基因功能富集分析：对预测的靶基因进行GO（基因本体）和KEGG（京都基因与基因组百科全书）富集分析，解析miRNA调控的生物学过程；富集显著性阈值为P值≤0.05，FDR≤0.05，支持可视化展示（如气泡图、柱状图）。

成熟miRNA绝对定量：采用数字PCR技术对样本中成熟miRNA的绝对含量进行定量，用于低丰度miRNA的精准检测；检测下限≤1copy/μL，定量误差≤10%，线性范围10^1~10^6copies/μL。

前体miRNA（pre-miRNA）检测：通过实时荧光定量PCR检测脂肪细胞中pre-miRNA的表达水平，分析miRNA加工成熟过程；检测灵敏度≥10^2copies/μL，线性相关系数R≥0.99，扩增效率90%~110%。

循环miRNA（circulatingmiRNA）测序：对临床血清/血浆样本中的循环miRNA进行高通量测序，寻找成脂相关生物标志物；样本要求为EDTA抗凝血浆，RNA提取量≥50ng，浓度≥10ng/μL，测序深度≥5Mreads/sample。

miRNA甲基化修饰分析：采用亚硫酸氢盐测序技术检测miRNA基因启动子区域的甲基化状态，探讨表观遗传调控机制；甲基化检测分辨率≥100bp，甲基化水平定量误差≤5%，支持全基因组甲基化芯片（可选）。

差异miRNA功能验证：通过细胞转染（过表达载体/抑制剂）验证miRNA对脂肪细胞分化的影响，采用油红O染色和脂滴含量测定评估分化效率；油红O染色阳性率变化≥20%（与对照组相比），脂滴含量变化≥30%，支持Westernblot检测分化标志物（如PPARγ、C/EBPα）。

miRNA与靶基因相互作用验证：采用双荧光素酶报告基因assay验证miRNA与靶基因3'UTR的结合；荧光素酶活性变化≥40%（与对照组相比），支持突变体验证（靶位点突变后活性恢复≥80%）。

检测范围

脂肪细胞样本：原代脂肪细胞、3T3-L1脂肪细胞株、人adipose-derivedstemcells（ADSCs）诱导分化前后的细胞；用于解析细胞内miRNA表达变化与成脂分化的关联。

动物组织样本：小鼠/大鼠附睾脂肪垫、皮下脂肪组织、肝脏脂肪浸润组织；用于体内成脂过程的miRNA调控研究。

临床血清/血浆样本：肥胖患者、2型糖尿病患者、非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）患者的外周血样本；用于寻找成脂相关miRNA生物标志物。

脂肪干细胞样本：人/动物adipose-derivedstemcells（ADSCs）、骨髓间充质干细胞（BMSCs）诱导成脂分化前后样本；用于研究干细胞成脂分化的miRNA机制。

植物脂肪组织样本：油料作物（如大豆、花生、油菜）种子发育过程中的胚乳/子叶组织；用于植物油脂合成的miRNA调控研究。

代谢疾病模型样本：db/db小鼠、ob/ob小鼠、高脂饮食诱导肥胖（HFD）小鼠的脂肪组织；用于代谢性疾病与成脂miRNA的关联研究。

药物处理样本：降脂药物（如罗格列酮、利拉鲁肽）、天然产物（如白藜芦醇、姜黄素）处理后的脂肪细胞或动物组织；用于药物对成脂miRNA的影响研究。

基因编辑样本：miRNA基因敲除（KO）/敲入（KI）细胞株（如3T3-L1KO细胞）、CRISPR/Cas9修饰的动物模型；用于验证miRNA的功能。

环境因素处理样本：高糖/高脂饮食、久坐不动、环境内分泌干扰物（如双酚A）诱导的肥胖动物组织；用于环境因素对成脂miRNA的调控研究。

干细胞外泌体样本：脂肪干细胞、间充质干细胞分泌的外泌体；用于研究外泌体中miRNA对成脂的旁分泌调控。

检测标准

ISO15693-1:2019分子生物标志物检测第1部分：通用要求；用于测序实验的质量控制（如样本采集、核酸提取、文库构建）。

GB/T30988-2014高通量测序技术规程；用于miRNA测序的实验操作规范（如测序文库制备、上机测序）。

ASTME2647-13(2018)生物信息学分析中差异表达基因筛选标准；用于差异miRNA筛选的统计分析（foldchange、P值、FDR）。

GB/T34796-2017基因表达谱数据处理规范；用于miRNA表达谱数据的归一化（如TPM、RPKM）和校正（批次效应）。

ISO20395:2019循环miRNA检测样本采集与处理；用于临床血清/血浆样本的预处理（如RNA稳定、外泌体分离）。

GB/T21767-2008生物样本库质量控制规范；用于细胞、组织样本的保存（如液氮保存、RNAlater处理）和管理。

ASTME3025-16靶基因预测与功能富集分析指南；用于生物信息学分析的方法学规范（如算法选择、富集阈值）。

GB/T37873-2019细胞转染实验技术规程；用于miRNA过表达/抑制载体的细胞转染（如脂质体转染、电转染）。

ISO17025:2017检测和校准实验室能力的通用要求；用于实验室质量管理体系（如人员资质、设备校准、结果溯源）。

GB/T19495.5-2018转基因产品检测第5部分：实时荧光定量PCR检测方法；用于miRNA定量验证（如qRT-PCR）。

检测仪器

高通量测序仪：用于成脂相关miRNA的高通量测序，支持单端/双端测序；读长≥50bp，测序通量≥100G/run，碱基识别准确率≥99.9%。

实时荧光定量PCR仪：用于差异miRNA的定量验证，支持多通道（≥4色）荧光检测；检测灵敏度≤10copies/反应，扩增效率90%~110%，重复性变异系数≤5%。

生物信息学分析系统：用于miRNA表达谱分析、靶基因预测及功能富集分析，支持批量处理（≥1000样本/次）；分析时间≤24小时/100样本，支持可视化输出（如火山图、热图）。

细胞转染仪：用于miRNA过表达载体/抑制剂的细胞转染，支持脂质体转染、电转染等方式；转染效率≥80%（针对3T3-L1细胞），细胞存活率≥70%。

激光共聚焦显微镜：用于观察脂肪细胞分化过程中脂滴的形成，支持油红O染色成像；分辨率≥10241024像素，放大倍数≥400，荧光信号检测灵敏度≥100molecules。

流式细胞仪：用于检测脂肪细胞分化标志物（如PPARγ、C/EBPα）的表达，支持多色（≥6色）荧光检测；检测精度≤1%，样本处理能力≥10000细胞/秒，支持自动分析软件。

数字PCR仪：用于低丰度miRNA的绝对定量，支持微滴式数字PCR；检测下限≤1copy/μL，定量误差≤10%，线性范围10^0~10^6copies/μL。

核酸提取仪：用于从细胞、组织、血清等样本中提取miRNA，支持自动提取（≥96样本/次）；提取效率≥90%，RNA纯度（A260/A280）≥1.8，RNA完整性（RIN）≥7.0。

电泳仪：用于miRNA测序文库的质量检测，支持变性聚丙烯酰胺凝胶电泳；分辨率≤10bp，条带清晰度≥90%，支持自动成像与分析。

生物芯片扫描仪：用于miRNA表达谱芯片（可选）的检测，支持荧光信号检测；分辨率≤5μm，信号-to-noiseratio≥30:1，扫描速度≥10mm/秒。

油红O染色成像系统：用于脂肪细胞分化的形态学评估，支持自动染色和成像；成像分辨率≥20482048像素，脂滴识别准确率≥95%，支持定量分析（脂滴面积、数量）。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。