组织样本高通量PCR检测

北检院检测中心  |  完成测试:  |  2025-08-30  

组织样本高通量PCR检测是一种基于聚合酶链反应的技术,用于大规模分析基因表达、突变和病原体核酸。检测要点包括样本核酸提取质量评估、引物和探针特异性验证、扩增效率优化、荧光信号采集标准化以及数据分析一致性控制,确保结果的准确性和可重复性。

注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试望见谅。

检测项目

基因表达定量分析:测量特定基因的mRNA表达水平,具体检测参数包括Ct值范围15-35 cycles、扩增效率90-110%、内参基因稳定性阈值Ct值差小于1。

突变检测:识别DNA序列中的点突变或插入缺失,具体检测参数包括灵敏度达0.1%、特异性高于99%、等位基因频率测量范围1-100%。

病原体核酸检测:检测病毒或细菌的特定核酸序列,具体检测参数包括检测限低至10 copies/μL、交叉反应性评估无假阳性、定量线性范围10^2-10^8 copies/μL。

拷贝数变异分析:评估基因拷贝数的增加或减少,具体检测参数包括相对定量精度±5%、参考基因归一化、动态范围1-10 copies。

甲基化状态检测:分析DNA甲基化水平,具体检测参数包括甲基化百分比测量范围0-100%、分辨率1%、亚硫酸氢盐转化效率大于95%。

微生物组多样性评估:测定样本中微生物群落组成,具体检测参数包括多样性指数Shannon值2-10、物种丰度测量、测序深度10,000 reads/sample。

药物敏感性测试:评估化合物对基因表达的影响,具体检测参数包括IC50值计算、剂量响应曲线R^2大于0.9、重复性CV小于15%。

生物标志物验证:确认疾病相关分子标志物,具体检测参数包括ROC曲线下面积AUC大于0.8、 cutoff值优化、特异性95%。

多路复用检测:同时检测多个靶标核酸,具体检测参数包括通道数4-6、交叉 talk抑制低于5%、效率一致性差异小于10%。

质量控制检测:监控实验过程的一致性和可靠性,具体检测参数包括样本完整性指数A260/A280比值1.8-2.0、扩增曲线斜率-3.0 to -3.5、阴性对照无扩增。

检测范围

肿瘤组织样本:用于癌症基因突变和表达谱分析,支持病理诊断和研究。

血液样本:检测血液传播病原体或循环肿瘤DNA,应用于疾病筛查。

组织活检样本:提供形态学结合分子检测,用于精准医疗决策。

细胞培养样本:分析体外细胞模型的基因表达变化,支持药物开发。

法医样本:进行DNA身份鉴定或亲缘分析,应用于司法科学。

环境样本:检测土壤或水中的微生物污染,用于环境监测。

农业样本:识别植物病原体或转基因成分,保障作物安全。

食品样本:分析食源性病原体或过敏原,确保食品安全。

临床样本:用于传染病诊断或遗传病检测,支持医疗实践。

研究样本:涵盖基础科学研究中的基因功能探索,促进科学发现。

检测标准

ISO 15189:医学实验室质量和能力的要求,涵盖PCR检测全过程质量控制。

GB/T 37872-2019:高通量测序技术规范,包括核酸提取和扩增标准。

ASTM E2887:实时荧光PCR性能评估标准,涉及灵敏度和特异性验证。

ISO 17025:检测和校准实验室能力的通用要求,确保结果准确性。

GB/T 19439-2004:病毒核酸检测方法,规定样本处理和检测程序。

ISO 13485:医疗器械质量管理体系,适用于诊断试剂相关检测。

GB/T 30989-2014:实时荧光PCR方法通则,涵盖引物设计和数据分析。

ASTM D6466:环境样本中PCR检测的标准指南,包括污染物控制。

ISO 22174:食品微生物PCR检测方法,确保食品安全应用可靠性。

GB/T 35828-2018:基因检测技术规范,涉及突变和表达分析标准。

检测仪器

实时荧光PCR仪:用于核酸扩增和实时荧光信号监测,具体功能包括温度循环控制和多通道荧光检测,参数涵盖温度精度±0.1°C、升降温速率4°C/s、检测动态范围10^6。

核酸提取仪:自动化纯化核酸从组织样本中,具体功能包括裂解、结合、洗涤和洗脱步骤,参数通量96样本/批次、提取效率大于90%、残留抑制剂低于5%。

微量分光光度计:测量核酸浓度和纯度,具体功能基于紫外吸光度原理,参数包括波长260 nm和280 nm、测量范围2-10000 ng/μL、A260/A280比值精度±0.05。

电泳系统:分析PCR产物大小和完整性,具体功能通过电场分离核酸片段,参数包括电压范围50-200 V、凝胶孔径0.8-2%、检测灵敏度1 ng。

生物分析仪:评估核酸样本质量如片段分布,具体功能使用微流体技术,参数包括灵敏度1 ng/μL、尺寸测量范围50-7000 bp、CV值小于5%。

热循环仪:执行PCR扩增反应,具体功能提供精确温度变化,参数包括温度均匀性±0.5°C、 block容量96 wells、程序存储容量100 methods。

荧光显微镜:观察组织样本中的荧光标记,具体功能用于原位PCR验证,参数包括放大倍数40-100x、激发波长范围450-650 nm、分辨率0.2 μm。

离心机:预处理样本如分离细胞组分,具体功能通过离心力沉降固体,参数包括最大转速15000 rpm、容量100 mL、温度控制4-40°C。

水浴锅:提供恒定温度孵育环境,具体功能用于试剂预热或反应 incubation,参数包括温度范围室温-100°C、稳定性±0.5°C、容量10 L。

微量加样器:精确移取液体样本和试剂,具体功能确保加样准确性,参数包括体积范围0.1-1000 μL、精度±1%、可重复性CV小于2%。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验,获取相关数据资料;

出具检测报告。

北检(北京)检测技术研究院
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