分子量电泳验证

检测项目

重组蛋白分子量测定：验证基因工程表达的重组蛋白的纯度与预估分子量是否一致，是下游应用的基础。

抗体轻重链鉴定：通过还原电泳分离抗体的重链和轻链，并测定其各自分子量，评估抗体完整性。

酶切产物分析：对限制性内切酶或蛋白酶消化后的DNA/蛋白质片段进行分子量分析，验证酶切效率与片段大小。

多肽合成验证：确认化学合成多肽的分子量与理论值相符，是评估合成成功与否的关键指标。

蛋白质复合物亚基分析：在变性条件下解离复合物，分析各组成亚基的分子量及比例。

蛋白质降解检测：通过观察电泳条带是否出现低于目标分子量的弥散或额外条带，判断样品是否发生降解。

核酸片段大小确定：对PCR产物、质粒酶切片段或RNA进行电泳，通过与分子量标准品对比确定其精确大小。

糖蛋白表观分子量评估：由于糖基化修饰，糖蛋白在电泳中的迁移率会发生变化，验证其表观分子量。

标记效率验证：对荧光标记、生物素标记等修饰后的蛋白质进行电泳，通过分子量偏移验证标记是否成功。

二硫键存在与否的初步判断：对比还原和非还原条件下的电泳结果，通过分子量差异初步判断分子内/间二硫键的存在。

检测范围

小分子多肽：适用于分子量在5 kDa以下的短肽分析，通常使用高浓度Tricine-SDS-PAGE系统。

常规蛋白质：覆盖10 kDa至250 kDa范围的绝大多数可溶性蛋白质的分子量测定。

大分子量蛋白：通过调整凝胶浓度或使用特殊梯度胶，可分析高达500 kDa甚至更大的蛋白质复合物或纤维蛋白。

DNA限制性片段：适用于100 bp至50 kb的DNA片段大小分析与验证。

PCR扩增产物：用于验证50 bp至5 kb范围内的PCR产物大小是否正确，有无非特异性扩增。

RNA完整性检查：通过非变性或变性胶电泳评估rRNA条带（28S/18S）的清晰度与比例，判断RNA降解程度。

病毒衣壳蛋白：用于分析病毒颗粒中各种结构蛋白的分子量，辅助病毒鉴定与纯度分析。

膜蛋白：虽然提取困难，但经适当变性处理后，可通过SDS-PAGE验证其分子量。

融合蛋白：验证由标签（如GST、His、GFP）与目标蛋白融合表达后的表观分子量。

蛋白质标记物：对预制的蛋白质分子量标准品本身进行验证，确保其标示分子量的准确性。

检测方法

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）：最经典的方法，蛋白质与SDS结合后均匀带负电，迁移率主要取决于分子量。

Tricine-SDS-PAGE：针对小分子量多肽（1-100 kDa）优化的方法，分离分辨率高于传统SDS-PAGE。

梯度凝胶电泳：使用丙烯酰胺浓度呈梯度增加的凝胶，可扩大线性分离范围，特别适合分子量跨度大的样品。

非变性（天然）PAGE：在不加SDS和还原剂的条件下进行，用于检测蛋白质的天然状态和活性形式，迁移率受电荷、形状和大小共同影响。

琼脂糖凝胶电泳：主要用于核酸（DNA/RNA）的分子量分析与分离，通过EB或其他染料染色观察。

变性琼脂糖凝胶电泳：在含有甲醛或乙二醛的琼脂糖凝胶中进行，用于RNA的分子量测定和完整性分析。

Western Blotting验证：电泳后转膜，用特异性抗体检测目标蛋白，是对分子量和身份的双重验证。

毛细管电泳（CE-SDS）：自动化、定量化的方法，用于高精度蛋白质分子量测定和纯度分析，尤其适用于生物制药行业。

双向电泳（2D-PAGE）：第一向基于等电点，第二向基于分子量分离，用于复杂蛋白质混合物中单个蛋白组分的分子量验证。

脉冲场凝胶电泳（PFGE）：用于分离超大片段DNA（10 kb至10 Mb），通过交替变换电场方向实现分离。

检测仪器设备

垂直板电泳槽：进行SDS-PAGE、天然PAGE的核心装置，用于制备和运行平板凝胶。

水平电泳槽：主要用于琼脂糖凝胶电泳，进行核酸样品的分离与分析。

电源供应器：为电泳过程提供稳定、可调的直流电压和电流，是控制分离速度与效果的关键。

凝胶成像系统：配备特定光源（紫外/白光）和CCD相机，用于拍摄并分析染色后的凝胶图像。

化学发光成像仪：专门用于检测Western Blotting中化学发光信号的高灵敏度成像设备。

毛细管电泳仪：集成自动进样、毛细管分离、紫外或激光诱导荧光检测的自动化分析平台。

凝胶扫描仪：高分辨率的平板扫描仪，用于对染色凝胶进行数字化成像和密度分析。

制胶器与灌胶架

微量进样器（移液器）：用于精确点样，将样品加入凝胶加样孔中，其准确性直接影响结果。

恒温循环水浴或金属浴：用于样品前处理中的变性加热步骤，确保蛋白质或核酸充分变性。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。