蛋白降解速率加速试验

检测项目

化学降解产物分析：定量检测由氧化、脱酰胺、水解等化学途径产生的蛋白变体或片段。

物理聚集度测定：评估蛋白质在应激条件下形成可溶或不溶性聚集体（如二聚体、寡聚体）的程度。

二级结构变化监测：通过光谱学方法监测蛋白质α-螺旋、β-折叠等二级结构在降解过程中的变化。

表面疏水性变化：检测蛋白质分子表面疏水区域的变化，反映其折叠状态和稳定性。

生物活性保留率：测定加速降解后蛋白质的生物学功能（如酶活性、受体结合能力）的保留百分比。

电荷异质性分析：检测因降解（如脱酰胺、片段化）导致的蛋白质电荷变体（如酸性、碱性峰）分布变化。

片段化与肽图分析：识别和定量由肽键断裂产生的蛋白片段，并进行肽图谱鉴定。

游离巯基含量测定：监测蛋白质分子中游离巯基（-SH）的数量变化，评估二硫键的稳定性。

外观与澄清度检查：观察样品在加速试验后是否出现浑浊、沉淀、变色或可见颗粒。

浓度损失测定：精确测量加速条件下因吸附或沉淀导致的蛋白质总浓度的下降。

检测范围

单克隆抗体药物：包括IgG1, IgG4等各种亚型的治疗性抗体及其衍生物（如ADC）。

重组治疗性蛋白：如细胞因子（干扰素、白介素）、生长激素、凝血因子、酶替代疗法用酶等。

疫苗抗原：包括重组蛋白疫苗、病毒样颗粒（VLP）等基于蛋白质的疫苗成分。

血液制品：如人血清白蛋白、免疫球蛋白、纤维蛋白原等血浆来源或重组蛋白。

肽类药物：较长链的多肽（通常大于50个氨基酸）的稳定性评估。

蛋白制剂与辅料：评估不同缓冲液、稳定剂、表面活性剂对蛋白稳定性的影响。

生物类似药：与原研药进行降解路径和速率的对比研究，以证明相似性。

诊断用蛋白试剂：如酶联免疫吸附试验中用到的酶标记抗体、抗原等。

细胞与基因治疗产品中的蛋白组分：如病毒载体外壳蛋白、培养基中添加的重组蛋白等。

食品与工业用酶：评估在特定工业或储存环境下酶的稳定性与失活动力学。

检测方法

高效液相色谱法：包括反相色谱、尺寸排阻色谱和离子交换色谱，用于分离和定量降解产物与聚集体。

毛细管电泳法：利用毛细管区带电泳或凝胶电泳进行高分辨率电荷异质性和纯度分析。

圆二色谱法：通过测量蛋白质的圆二色性信号，灵敏地监测其二级结构的构象变化。

动态光散射法：快速测定蛋白质流体力学半径和粒径分布，用于早期聚集检测。

差示扫描量热法：通过测量蛋白质热变性温度来评估其热稳定性及与配体的结合作用。

荧光光谱法：利用内源荧光（色氨酸）或外源荧光染料探测蛋白质三级结构的变化和表面疏水性。

紫外-可见分光光度法：进行蛋白质浓度测定，并监测280nm附近或可见光区的吸光度变化以判断聚集或变色。

生物活性测定法：采用细胞学实验、酶动力学分析或基于ELISA的结合实验来定量功能活性。

质谱分析法：包括完整分子量测定和肽图分析，精确鉴定降解位点及修饰类型（如氧化、脱酰胺）。

显微成像技术：使用微流成像或光学显微镜观察和计数不溶性微粒及亚可见颗粒。

检测仪器设备

高效液相色谱仪：配备多种检测器（UV， FLD， RID）和色谱柱，用于自动化分离分析。

UPLC/UHPLC系统：超高效液相色谱系统，提供更高的分离速度、分辨率和灵敏度。

毛细管电泳仪：用于高精度电荷变异体分析和纯度检测，尤其适用于单抗等复杂样品。

圆二色谱仪：专门用于研究蛋白质二级结构及其在溶液中的构象变化。

动态光散射仪：用于实时监测蛋白质粒径大小和分布，评估聚集趋势。

差示扫描量热仪：精确测量蛋白质的热变性曲线，获得热力学稳定性参数。

荧光分光光度计：用于测量蛋白质的内源荧光发射光谱或进行外源荧光探针实验。

紫外-可见分光光度计：基础设备，用于快速测定蛋白质浓度和扫描光谱。

高分辨率质谱仪：如Q-TOF， Orbitrap等，用于蛋白质分子量精确测定和降解产物质谱鉴定。

微流成像颗粒分析系统

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。