蛋白质杂质试验

检测项目

宿主细胞蛋白残留：检测产品中来自生产所用宿主细胞（如CHO、大肠杆菌）的非目标蛋白杂质，是评估产品纯度和安全性的关键指标。

宿主细胞DNA残留：定量分析产品中残留的宿主细胞基因组DNA，以控制潜在的致癌和免疫原性风险。

Protein A残留：检测在抗体纯化过程中从亲和层析介质中浸出的Protein A配体，其具有免疫毒性。

内毒素：检测由革兰氏阴性菌产生的脂多糖，是强效的热原物质，必须严格控制在限值内。

产品相关杂质（聚集体）：检测蛋白质分子的多聚体形式，可能影响产品疗效并增加免疫原性风险。

产品相关杂质（片段）：检测因降解或酶切产生的蛋白质片段，可能影响产品的生物学活性和稳定性。

培养基成分残留：检测如胰岛素、生长因子、抗生素等生产培养基中添加成分的残留。

下游工艺杂质：检测纯化过程中引入的杂质，如层析填料浸出物、有机溶剂、去垢剂等。

外源性病毒：检测可能在生产过程中引入的病毒污染物，确保产品无病毒污染。

宿主细胞病毒：检测用于生产的细胞系本身携带的病毒或内源性逆转录病毒颗粒。

检测范围

治疗性单克隆抗体：包括人源化、嵌合及全人源抗体，是蛋白质杂质检测最主要的应用领域。

重组治疗性蛋白：如细胞因子、激素、酶、凝血因子等，需严格控制生产工艺相关杂质。

融合蛋白：由不同蛋白功能域融合而成，需关注其独特的聚集倾向和降解片段。

抗体偶联药物：除抗体部分杂质外，还需关注连接子和小分子毒素相关的杂质。

血液制品：如人血白蛋白、免疫球蛋白等，需检测血浆来源可能带来的病原体等杂质。

疫苗（蛋白亚单位疫苗）：关注重组表达系统带来的宿主杂质以及佐剂相关杂质。

细胞与基因治疗产品：生产过程中使用的辅助蛋白（如血清、细胞因子）需作为杂质进行检测。

诊断用蛋白试剂：确保试剂的纯度与特异性，避免杂质干扰检测结果。

生物类似药：需进行全面的杂质谱分析，并与原研药进行比对，证明其可比性。

临床前与临床研究样品：在药物研发各阶段，对工艺样品进行杂质监控，以支持工艺开发和安全性评价。

检测方法

酶联免疫吸附测定法：基于抗原-抗体反应的高灵敏度方法，广泛用于宿主细胞蛋白、Protein A等特异性杂质的定量。

高效液相色谱法：利用色谱柱分离，常用于分析蛋白质聚集体、片段及电荷异质性等产品相关杂质。

毛细管电泳法：包括CE-SDS和cIEF，分别用于分析蛋白质大小变异体和电荷变异体，分辨率高，样品消耗少。

聚合酶链式反应法：用于高灵敏度检测宿主细胞DNA残留，特别是qPCR法可实现精确定量。

动态光散射法：通过测量溶液中颗粒的布朗运动来快速评估蛋白质样品的聚集状态和粒径分布。

质谱分析法：包括LC-MS/MS，可用于杂质鉴定、序列确认及未知杂质的结构解析，特异性强。

鲎试剂法：基于鲎血凝固原理，是检测内毒素的经典、标准方法，包括凝胶法和光度法。

细胞培养法：用于外源性病毒检测，通过观察病毒对敏感细胞系的致病变效应来判断。

免疫印迹法：用于特定杂质的定性或半定量分析，可提供分子量信息，但定量准确性较低。

分析超速离心法：一种无固相分离的分析技术，能在接近天然状态下精确测定蛋白质的聚集态和分子量。

检测仪器设备

酶标仪：用于读取ELISA等基于微孔板的检测实验的吸光度或荧光信号，实现高通量定量分析。

高效液相色谱仪：核心分离设备，配备不同检测器（如UV、荧光、示差）用于各类色谱分析。

毛细管电泳仪：执行CE-SDS、cIEF等毛细管电泳分析的专业设备，自动化程度高。

实时荧光定量PCR仪：用于执行qPCR实验，对宿主细胞DNA残留进行精确定量，灵敏度极高。

动态光散射仪：专门用于测量纳米颗粒的粒径和分布，快速评估蛋白质溶液的聚集情况。

质谱仪：尤其是与液相色谱联用的LC-MS/MS系统，是进行蛋白质杂质鉴定和结构分析的关键设备。

鲎试剂检测系统：包括试管、加热块或专用的光度法检测仪，用于内毒素的定性与定量检测。

生物安全柜/细胞培养箱：为病毒检测等细胞培养实验提供无菌、安全的环境。

蛋白印迹系统：包括电泳、转膜、成像等模块，用于完成免疫印迹实验。

分析型超速离心机：配备光学检测系统，用于在高速离心过程中实时监测样品的沉降行为。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。