细胞毒性 MTT 实验

检测项目

细胞存活率测定：通过检测活细胞线粒体脱氢酶活性，定量评估药物或化合物处理后细胞的相对存活比例。

药物半数抑制浓度计算：通过检测不同浓度药物作用下的细胞存活率，计算抑制50%细胞生长的药物浓度。

化合物细胞毒性筛选：快速评估一系列化合物对特定细胞系的初步毒性效应，用于高通量筛选。

抗癌药物药效评价：评估化疗药物、靶向药物或新型抗癌制剂对肿瘤细胞系的增殖抑制能力。

纳米材料生物安全性评估：检测纳米颗粒、纳米载体等纳米材料对细胞的潜在毒性作用。

医疗器械浸提液生物相容性测试：评估医疗器械材料浸提液对L929等标准细胞系的细胞毒性，符合ISO 10993-5标准。

化妆品原料刺激性评价：初步筛选化妆品原料或成品对皮肤细胞的毒性，作为安全性评价依据。

环境污染物毒性检测：研究重金属、有机污染物等环境因子对水生或哺乳动物细胞的毒性影响。

基因功能研究中的表型验证：在基因过表达或敲除后，通过MTT实验验证其对细胞增殖或存活的影响。

辐射敏感性测定：评估不同细胞系或处理条件下，细胞对电离辐射的敏感性差异。

检测范围

贴壁肿瘤细胞系：适用于HeLa、HepG2、A549、MCF-7等常见贴壁生长的肿瘤细胞。

悬浮肿瘤细胞系：适用于HL-60、K562、Jurkat等悬浮生长的淋巴细胞系，需优化离心步骤。

原代培养细胞：可用于原代肝细胞、神经元、成纤维细胞等，但其代谢活性可能影响结果解读。

干细胞：适用于间充质干细胞、胚胎干细胞等，用于评估分化诱导剂或培养条件的毒性。

正常细胞系：如人脐静脉内皮细胞、肾上皮细胞等，常用于评价药物的选择性毒性。

微生物细胞：经过方法改良，也可用于评估抗菌药物对真菌或细菌的抑制效果。

三维细胞球体：对传统方法进行优化后，可用于检测药物对三维培养细胞球体的渗透与毒性。

植物细胞：适用于某些植物悬浮细胞，用于评估农业化学品或环境胁迫的毒性。

昆虫细胞系：如Sf9、Sf21细胞，用于杆状病毒表达系统相关产品的安全性测试。

鱼类细胞系：如RTG-2、CHSE-214等，常用于环境毒理学的水生生物毒性评估。

检测方法

细胞接种与培养：将对数生长期细胞消化计数，以适当密度接种于96孔板，在CO2培养箱中贴壁过夜。

受试物处理：吸弃旧培养基，加入含不同浓度梯度受试物（药物、化合物等）的新鲜培养基。

设置对照组：必须设立空白对照组、溶剂对照组和阳性对照组，以确保实验系统有效。

培养孵育：将处理后的细胞板放回培养箱，在37°C、5% CO2条件下继续培养预定时间。

MTT溶液添加：到达处理时间后，每孔加入新鲜配制的MTT溶液，继续孵育2-4小时。

甲瓒溶解：小心吸弃孔内上清液，避免吸走形成的紫色甲瓒结晶，每孔加入DMSO或SDS-HCl溶解液。

结晶溶解与混匀：将培养板置于摇床上低速振荡10-15分钟，确保甲瓒结晶完全溶解。

吸光度检测：使用酶标仪在490 nm或570 nm波长处测定各孔的吸光度值。

数据计算与分析：计算各实验组相对于对照组的细胞存活率，使用软件绘制剂量-效应曲线并计算IC50值。

结果验证与重复：所有实验至少独立重复三次，并进行统计学分析，以确保结果的可靠性与显著性。

检测仪器设备

二氧化碳培养箱：提供稳定的37°C温度、95%湿度和5% CO2气体环境，用于细胞培养与处理。

超净工作台：提供无菌操作环境，用于细胞传代、接种及实验过程中的无菌操作。

倒置显微镜：用于观察细胞形态、贴壁状况、污染情况以及处理后的形态学变化。

酶标仪：核心检测设备，用于读取96孔板各孔在特定波长下的吸光度值，需具备490 nm或570 nm滤光片。

细胞计数仪或血球计数板：用于精确计数细胞，确保每次实验接种的细胞密度一致。

多功能微量移液器：用于精确加样MTT溶液、受试物、培养基及溶解液，范围覆盖1μL至1mL。

恒温水浴锅：用于预热培养基、胰蛋白酶等试剂至37°C，减少对细胞的温度刺激。

低速离心机：用于悬浮细胞的收集、洗涤及重悬，确保细胞沉淀完全。

涡旋振荡器与平板摇床：用于溶解甲瓒结晶时混匀孔内液体，确保溶解均匀。

高压蒸汽灭菌器：用于实验所用器械、玻璃器皿及废液的灭菌处理，保证实验安全。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。