高分辨质谱蛋白质组学分析

检测项目

蛋白质鉴定：通过分析肽段质谱数据，与数据库比对，实现对样品中蛋白质种类的精确鉴定。

蛋白质定量分析：采用标记（如TMT、iTRAQ）或非标记（Label-free）技术，对不同样本中蛋白质的表达水平进行相对或绝对定量。

翻译后修饰鉴定：特异性富集并鉴定蛋白质的磷酸化、乙酰化、泛素化、糖基化等多种翻译后修饰位点与类型。

蛋白相互作用分析：通过亲和纯化-质谱联用技术，解析蛋白质复合物的组成及相互作用网络。

差异表达蛋白筛选：通过比较不同生理或病理状态下的蛋白质组，筛选出表达量发生显著变化的蛋白质。

蛋白质从头测序：在不依赖数据库的情况下，直接根据质谱碎片信息推导未知蛋白质或新变体的氨基酸序列。

亚细胞器蛋白质组分析：分离特定细胞器（如线粒体、细胞核），研究其蛋白质组成和功能。

生物标志物发现：从临床样本（如血液、组织）中寻找与疾病诊断、预后或疗效相关的特征性蛋白质分子。

蛋白质组学数据验证：利用平行反应监测或选择反应监测等高选择性靶向质谱技术对发现组的结果进行验证。

绝对定量分析：使用已知浓度的同位素标记合成肽段作为内标，实现对目标蛋白质的绝对摩尔数或浓度测定。

检测范围

全细胞裂解液：对细胞整体蛋白质组成进行分析，覆盖可溶性及膜蛋白，提供全局视图。

组织样本：包括新鲜冷冻组织、福尔马林固定石蜡包埋组织等，用于研究组织特异性蛋白表达。

体液样本：如血浆、血清、尿液、脑脊液等，是寻找疾病生物标志物的主要来源。

分泌蛋白与外泌体：分析细胞分泌到培养基中的蛋白质或外泌体携带的蛋白，用于细胞通讯研究。

特定蛋白复合物：通过免疫共沉淀等技术富集的特定靶蛋白及其相互作用伙伴。

酶解肽段混合物：经胰蛋白酶等蛋白酶消化后产生的复杂肽段混合物，是质谱直接分析的常见样本形式。

经过预分离的组分：如通过SDS-PAGE、液相色谱等预分离得到的简化蛋白或肽段组分。

修饰特异性富集样品：使用抗体或化学方法富集含有特定修饰（如磷酸化肽段）的样品。

低丰度蛋白样本：通过高灵敏度设备和技术，检测在复杂样本中含量极低的蛋白质。

微生物与植物样本：应用于细菌、真菌、植物等非哺乳动物体系的蛋白质组学研究。

检测方法

液相色谱-串联质谱联用：核心平台技术，利用液相色谱分离肽段，再由高分辨质谱进行序列分析与定量。

鸟枪法蛋白质组学：将复杂蛋白质混合物酶解后直接进行LC-MS/MS分析，是主流的全局性分析策略。

数据依赖性采集：最常用的质谱扫描模式，自动选择强度最高的前体离子进行碎裂，适用于发现性研究。

数据非依赖性采集：将选定质荷比窗口内的所有前体离子同时碎裂，提高重复性和低丰度肽段的检出率。

平行反应监测/选择反应监测：靶向质谱扫描模式，对特定离子对进行高灵敏度、高特异性的监测，用于目标蛋白验证与精确定量。

等重标签标记技术：如TMT、iTRAQ，使用多种同位素标签标记不同样本的肽段，混合后上机，实现多重样本的高通量相对定量。

非标记定量技术：基于肽段质谱峰强度或谱图计数进行相对定量，无需化学标记，流程简单且成本较低。

自上而下蛋白质组学：直接对完整蛋白质进行质谱分析，保留完整的翻译后修饰信息与蛋白变异体信息。

亲和纯化质谱联用: 将靶蛋白的亲和纯化与质谱鉴定结合，用于绘制蛋白质-蛋白质相互作用图谱。

稳定同位素标记氨基酸细胞培养技术: 在细胞培养过程中掺入稳定同位素标记的必需氨基酸，实现体内代谢标记，用于精准定量。

检测仪器设备

高分辨轨道阱质谱仪: 如Orbitrap系列，具有超高分辨率、高质量精度和宽动态范围，是主流的核心设备。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。