鱼类冷链产品核酸检测

检测项目

鱼类冷链产品核酸检测体系包含四大核心指标模块：新型冠状病毒（SARS-CoV-2）ORF1ab/N基因片段筛查作为疫情防控重点监测项目；甲型肝炎病毒（HAV）RNA检测依据GB 10136-2015标准执行；诺如病毒（NoV）GI/GII型核酸检测参照SN/T 4784-2017规范；单核细胞增生李斯特氏菌（Lm）核酸鉴定采用ISO 11290-1:2017方法学标准。

补充性检测项目涵盖：冷链环境样本中肺炎克雷伯菌（Kp）特异性基因khe鉴定；副溶血性弧菌（Vp）toxR基因检测；沙门氏菌（Salmonella）invA基因筛查。所有项目均设置内参基因（如RNase P）进行核酸提取质控，采用双重荧光探针系统实现靶标同步扩增监控。

检测范围

适用对象包括：-18℃以下储运的整鱼类制品（含冰衣重量≥20%）；深冷处理的鱼糜制品（中心温度≤-35℃）；速冻调理鱼类产品（IQF工艺）；冷链中转环节的拭子样本（包括运输工具内壁、周转箱表面及操作台面）。

采样规范要求：整鱼样本取鳃部组织与体表黏液混合采样；分割制品按每批次抽取3个独立包装的肌肉组织；环境拭子采用25cm²规格化采样面积。样本运输须使用95kPa正压生物安全运输罐，维持2-8℃冷链不超过48小时。

检测方法

采用三重质控体系：①核酸提取阶段加入Process Control；②扩增体系内置Internal Control；③每批次设置Negative/Positive Control。具体流程：样本经蛋白酶K裂解后，使用磁珠法核酸提取试剂盒纯化RNA/DNA复合物。

扩增程序设定：预变性95℃ 30秒；45个循环的95℃ 5秒→60℃ 30秒（荧光采集）；熔解曲线分析阶段以0.3℃/s速率从60℃升至95℃。阈值循环数（Ct值）判定标准：靶标通道≤40且熔解温度（Tm值）偏差±1.5℃内视为阳性。

检测仪器

核心设备配置：ABI 7500 Fast Dx实时荧光定量PCR系统（具备SDS 1.4分析模块）；QIAcube全自动核酸提取工作站；BSC-1500IIA2生物安全柜（H14级过滤）。辅助设备包含：Thermo Forma 900系列超低温冰箱（-86℃±3℃温控精度）；Eppendorf 5810R高速冷冻离心机（最大RCF 30,130×g）。

计量器具均通过CNAS校准认证：微量移液器执行JJG 646-2006检定规程；恒温金属浴符合JJF 1664-2017校准规范；生物安全柜风速传感器按JG 170-2018进行年度校准。数据管理系统配备LIMS实验室信息管理平台，实现检测数据自动抓取与审计追踪功能。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。