质粒抽提标准检测

检测项目

质粒浓度测定、A260/A280比值分析、A260/A230比值测定、内毒素含量检测、宿主DNA残留量分析、RNA残留量测定、超螺旋结构比例计算、开环结构含量分析、线性质粒含量测定、核酸酶活性检测、蛋白质残留量分析、菌体碎片残留检验、抗生素抗性验证、限制性内切酶酶切验证、PCR扩增效率测试、转化效率测定、拷贝数定量分析、热稳定性测试、冻融稳定性检验、长期保存稳定性监测、无菌试验验证、支原体污染筛查、噬菌体污染检测、粒径分布分析（超螺旋质粒）、zeta电位测定（纳米级质粒复合物）、荧光定量PCR验证（靶基因表达）、Sanger测序验证（插入片段）、NGS深度测序（全序列分析）、Southernblot杂交验证（结构完整性）、Westernblot验证（标签蛋白表达）

检测范围

大肠杆菌培养液提取物、重组质粒样本、低拷贝质粒样本、高拷贝质粒样本、大分子量质粒（>20kb）、微型环状DNA（<3kb）、哺乳动物表达载体样本、病毒载体骨架质粒样本、CRISPR-Cas9系统载体样本、shRNA表达载体样本、报告基因载体样本（如pGL3）、原核启动子调控载体样本（如pET系列）、真核启动子调控载体样本（如pcDNA3.1）、Gateway克隆系统载体样本、BAC文库载体样本（>100kb）、纳米颗粒包裹质粒复合物样本（基因治疗用）、阳离子脂质体复合质粒样本（转染试剂复合物）、冻干粉状态质粒样本（长期保存型）、磁珠法纯化中间产物样本（硅基磁珠结合相）、柱式纯化中间产物样本（硅胶膜结合相）、氯化铯梯度离心产物样本（超纯化工艺）、PEG沉淀中间产物样本（粗提阶段产物）、碱裂解上清液中间产物样本（工艺过程监控）、溶菌酶处理中间产物样本（细胞壁裂解阶段）、RNaseA处理中间产物样本（RNA去除阶段）、异丙醇沉淀中间产物样本（浓缩阶段产物）、透析袋纯化终产物样本（小分子去除阶段）、超滤浓缩终产物样本（分子筛纯化阶段）

检测方法

1.分光光度法：采用紫外-可见分光光度计测定A260/A280/A230值，计算核酸浓度及纯度比值2.荧光定量法：使用Qubit荧光计配合dsDNAHS试剂盒进行高灵敏度浓度测定3.琼脂糖凝胶电泳：通过0.8%-1.2%凝胶电泳分析质粒构象及完整性4.毛细管电泳：采用Agilent2100生物分析仪进行高分辨率核酸片段分析5.动态光散射技术：MalvernZetasizerNano测定纳米级质粒复合物的粒径分布6.LAL显色法：基于鲎试剂的内毒素定量检测系统7.qPCR定量法：TaqMan探针法定量宿主基因组残留8.HPLC-SEC分析：TSKgelG5000PWxl色谱柱分离不同构象质粒9.数字PCR技术：微滴式数字PCR系统进行绝对拷贝数定量10.原子力显微镜观察：BrukerMultimode8系统进行单分子结构表征

检测标准

ISO9001:2015质量管理体系-要求ISO/IEC17025:2017检测和校准实验室能力通用要求USP<1043>细胞与基因治疗产品辅料质量要求EP2.6.14细菌内毒素测试GB/T34790-2017核酸浓度与纯度测定通用方法YY/T1180-2021分子生物学检验用质控品通用技术要求ICHQ5A(R1)来源于人或动物细胞系的生物技术产品的病毒安全性评价FDAGuidanceforIndustry:GeneTherapyClinicalTrials-ObservingSubjectsforDelayedAdverseEventsPIC/SPE009-17GMP指南附录13:临床试验用药生产EMEA/CHMP/BWP/2458/2009基因治疗医药产品质量控制指南

检测仪器

1.NanoDropOne/OneC微量分光光度计：用于快速测定核酸溶液吸光度值及纯度比值2.AgilentBioanalyzer2100系统：基于微流控芯片的自动化电泳分析平台3.ThermoFisherQubit4.0荧光计：高灵敏度双通道荧光定量设备4.MalvernZetasizerPro纳米粒度仪：动态光散射技术测定颗粒尺寸与Zeta电位5.WatersACQUITYUPLCH-Class系统：超高效液相色谱进行核酸分离纯化分析6.AppliedBiosystemsQuantStudio7Pro实时荧光定量PCR仪：高精度热循环扩增系统7.BeckmanCoulterOptimaXPN-100超速离心机：配备近垂直转子的高速离心设备8.EppendorfBioSpectrometerbasic紫外可见分光光度计：全波长扫描型光谱分析仪9.Bio-RadChemiDocMP成像系统：多光谱荧光/化学发光凝胶成像平台10.SartoriusCubisII微量天平：百万分之一级精密称量设备

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。