葡萄轴枯病菌检疫检测

检测项目

病原菌分离培养、菌丝形态观察、分生孢子特征分析、子囊壳发育监测、致病性测定、ITS序列比对、β-tubulin基因扩增、EF-1α基因测序、产孢能力评估、温度适应性测试、pH耐受性分析、碳氮源利用试验、抗菌药物敏感性试验、毒素合成能力检测、寄主范围验证、潜伏期观察、侵染模式研究、菌株遗传多样性分析、抗药性基因筛查、代谢产物色谱分析、细胞壁降解酶活性测定、生物膜形成能力评估、分子标记开发验证、实时荧光定量PCR验证、LAMP快速检测技术建立、免疫层析试纸条开发应用、电子显微镜超微结构观察、光谱特征数据库构建

检测范围

葡萄主干木质部样本、修剪伤口组织样本、新生枝条维管束切片、叶柄基部病变组织块状样本、花序枯萎样本浆果表皮附着物采样筛出物土壤根际微生物群落样本灌溉水沉淀物采集嫁接刀具表面擦拭样苗木运输包装材料碎屑冷库贮藏环境空气滤膜温室栽培基质样本实验室培养基残留物葡萄酒发酵残渣有机肥腐熟样本昆虫媒介体表附着物花粉传播媒介样本砧木接口愈合组织样本气传孢子捕捉样本雨水径流沉积物样本器械消毒后残留测试样苗木检疫隔离区环境监测样进口种苗表皮刮取样组培苗污染源排查样

检测方法

1.组织分离培养法：将病健交界处组织经表面灭菌后接种于PDA培养基，25℃暗培养7天后观察菌落形态特征

2.显微形态鉴定法：采用棉蓝乳酚油染色观察分生孢子器形态及产孢细胞排列方式

3.多重PCR检测法：设计Eutypalata特异性引物组EutF/EutR(扩增片段287bp)与内参引物组ITS1/ITS4联合扩增

4.实时荧光定量PCR法：基于TaqMan探针技术建立病原菌绝对定量模型，灵敏度达10copies/μL

5.LAMP快速检测法：针对β-tubulin基因保守区设计6条引物实现63℃恒温扩增，结果可通过浊度计判定

6.ELISA血清学检测：使用单克隆抗体捕获菌丝体可溶性蛋白抗原进行双抗夹心法测定

7.气相色谱-质谱联用法：分析特征性代谢产物eutypine毒素的分子离子峰(m/z179)

8.激光共聚焦显微术：采用CalcofluorWhite染色观察菌丝穿透木质部导管的侵染模式

检测标准

ISO16140-3:2021微生物学-方法验证-第3部分：参考方法在食品链微生物学中的验证协议

GB/T36851-2018植物检疫术语

SN/T2124-2020进出境植物病原真菌检疫规程

EPPOPM7/98(2)Eutypalata诊断规程

APHISPPQCPHSTPestDatasheetforEutypalata

ISO/IEC17025:2017检测和校准实验室能力通用要求

GB/T3543.5-1995农作物种子检验规程真实性和品种纯度鉴定

NY/T401-2000水果无病毒母本树和苗木检疫规程

ISPM27:2006限定性有害生物诊断规程

T/CATCM003-2017中药材及饮片外源性有害物质限量标准

检测仪器

1.PCR扩增仪：用于进行常规PCR及荧光定量PCR反应模块控温精度0.1℃

2.全自动微生物鉴定系统：集成VITEK2Compact的比色卡自动判读功能

3.超景深三维显微镜：配备微分干涉对比(DIC)模块实现菌丝隔膜结构高清成像

4.凝胶成像分析系统：采用冷CCD相机捕获核酸电泳图像并自动计算条带强度

5.超高效液相色谱仪：配置Q-TOF质谱仪实现eutypine毒素的痕量检测

6.恒温恒湿培养箱：具备多段程序控制功能满足不同菌株生长需求

7.生物安全柜：ClassIIA2型提供样品处理时的双向防护屏障

8.全自动酶标仪：支持450nm/630nm双波长读取ELISA板吸光值

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。