菌悬液浓度标定检测

北检院检测中心  |  完成测试:  |  2025-08-13  

菌悬液浓度标定是微生物检测中的关键步骤,直接影响后续实验结果的准确性,需通过标准化方法测定单位体积内的活菌数量,确保浓度符合实验或生产要求。

注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试望见谅。

检测项目

活菌计数(平板涂布法):通过平板涂布菌悬液,培养后计数菌落数计算活菌浓度,检测范围10²~10⁸ CFU/mL,计数误差≤10%。

活菌计数(倾注平板法):将菌悬液与融化培养基混合,培养后计数菌落数,适用于兼性厌氧微生物,检测范围10¹~10⁷ CFU/mL,重复性≤8%。

浊度法标定(麦氏比浊法):通过分光光度计测量菌悬液吸光度,与标准麦氏比浊管对比确定浓度,测量波长600nm,吸光度范围0.05~1.0,对应浓度10⁵~10⁸ CFU/mL。

浊度法标定(分光光度法):使用分光光度计测定菌悬液特定波长吸光度,建立吸光度与活菌浓度标准曲线,波长可选450~660nm,吸光度精度±0.001,线性相关系数≥0.99。

荧光染色计数(活菌/死菌区分):采用SYBR Green I和PI荧光染料染色,通过荧光显微镜或流式细胞仪计数活菌数,检测范围10³~10⁹ CFU/mL,荧光强度分辨率≤5%。

流式细胞术计数:利用流式细胞仪对菌悬液中微生物进行快速计数,可区分活菌与死菌,检测速度≥1000 cells/s,计数误差≤5%。

比浊法(nephelometry):通过浊度计测量菌悬液散射光强度,与标准曲线对比确定浓度,测量范围0.1~100 NTU,分辨率0.01 NTU。

干重法:将菌悬液离心后干燥至恒重,计算单位体积内微生物干重,适用于丝状真菌或细菌,检测范围1~1000 mg/L,重量误差≤2%。

液体稀释法(MPN法):将菌悬液系列稀释后接种至液体培养基,根据阳性管数计算最可能数,适用于难培养微生物,检测范围10⁰~10⁶ MPN/mL,置信区间95%。

核酸定量法(qPCR):通过实时荧光定量PCR检测菌悬液中特异性核酸片段,计算微生物浓度,检测下限10¹ copies/mL,重复性≤10%。

检测范围

微生物发酵液:用于抗生素、酶制剂等发酵生产中的菌浓度监测。

疫苗生产用菌悬液:确保疫苗生产中抗原浓度符合规定要求。

食品微生物检测样品:如酸奶、发酵肉制品中的益生菌浓度标定。

环境监测菌悬液:用于水质、土壤中污染微生物的浓度测定。

生物肥料菌悬液:检测生物肥料中有效功能菌(如固氮菌)的浓度。

动物饲料添加剂菌悬液:确保饲料添加剂中有益微生物(如乳酸菌)的含量。

化妆品防腐剂效能测试菌悬液:用于评价化妆品中防腐剂对微生物的抑制效果。

pharmaceutical 中间体菌悬液:检测药物中间体中微生物污染的浓度。

农业生防菌悬液:用于生物防治中的生防菌(如芽孢杆菌)浓度标定。

实验室质控菌悬液:作为实验室内部质量控制的标准物质,确保检测结果的准确性。

检测标准

GB/T 4789.2-2020 食品微生物学检验 菌落总数测定:规定了食品中菌落总数的测定方法,适用于食品菌悬液的活菌计数。

ISO 4833-1:2013 食品和动物饲料的微生物学 菌落总数的测定 第1部分:通过倾注平板法在30℃下进行的菌落计数:国际标准,用于食品和饲料菌悬液的菌落计数。

GB/T 15445-2013 微生物浊度法测定通则:规定了微生物浊度法的测定原理、仪器、步骤和结果计算,适用于菌悬液浓度的浊度标定。

ASTM E2149-20 流式细胞术测定微生物细胞计数的标准试验方法:美国材料与试验协会标准,用于流式细胞仪对菌悬液的计数。

ISO 11290-1:2017 食品和动物饲料的微生物学 单核细胞增生李斯特氏菌的检测和计数 第1部分:检测方法:国际标准,用于李斯特氏菌菌悬液的浓度测定。

GB/T 20886-2007 芽孢杆菌活菌数的测定:规定了芽孢杆菌菌悬液中活菌数的测定方法,适用于生物肥料、饲料添加剂等。

ISO 6222:2019 水的微生物学 菌落总数的测定 平板计数法:国际标准,用于水质菌悬液的菌落计数。

GB/T 38480-2020 微生物溯源技术规范:规定了微生物溯源中的菌悬液浓度标定方法,适用于环境和食品中的微生物溯源。

ASTM D5465-20 水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的标准试验方法(膜过滤法):用于水中大肠菌群菌悬液的浓度测定。

ISO 10705-1:2016 水的微生物学 噬菌体的检测和计数 第1部分:体细胞噬菌体的计数:国际标准,用于噬菌体菌悬液的浓度测定。

检测仪器

全自动菌落计数器:采用图像识别技术,自动计数平板上的菌落数,减少人为误差,适用于活菌计数(平板涂布法、倾注平板法)的结果统计,计数速度≥100平板/小时,准确率≥95%。

分光光度计:通过测量菌悬液在特定波长(如600nm)下的吸光度,与标准曲线对比计算浓度,适用于浊度法标定,波长范围320~1100nm,吸光度精度±0.001。

荧光显微镜:配备荧光光源和滤镜,观察荧光染色后的菌悬液样本,计数活菌数,适用于荧光染色计数法,放大倍数100~1000倍,荧光激发波长可选365nm、488nm等。

流式细胞仪:通过激光照射菌悬液中的微生物细胞,检测散射光和荧光信号,实现快速计数和分类,适用于流式细胞术计数,检测速度≥10000 cells/s,通道数≥4。

实时荧光定量PCR仪:通过检测PCR过程中荧光信号的积累,定量菌悬液中的核酸浓度,计算微生物数量,适用于核酸定量法(qPCR),检测通道≥5,灵敏度≤10 copies/反应。

浊度计:测量菌悬液的散射光或透射光强度,直接读取浊度值,适用于比浊法(nephelometry),测量范围0~1000 NTU,分辨率0.01 NTU。

电子天平:用于干重法中微生物细胞的重量测定,需要高精度天平,量程0~200g,精度≤0.1mg。

微生物培养箱:提供恒温环境,用于菌悬液培养后的菌落生长,温度范围10~60℃,精度±0.5℃。

离心机:用于干重法中菌悬液的离心收集,转速范围0~15000 rpm,容量≥50mL。

酶标仪:用于荧光染色计数或浊度法中的吸光度测量,适用于微孔板样本,检测波长340~900nm,孔间变异≤1%。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验,获取相关数据资料;

出具检测报告。

北检(北京)检测技术研究院
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