药物相互作用体外研究

检测项目

CYP450酶抑制试验：评估候选药物对细胞色素P450同工酶（如CYP3A4, 2D6）活性的抑制作用，预测其抑制其他药物代谢的潜力。

CYP450酶诱导试验：通过检测酶活性或mRNA/蛋白表达水平，评估候选药物对CYP450酶的诱导作用，预测其可能降低联用药物疗效的风险。

时间依赖性抑制评估：鉴别候选药物是否为CYP450酶的时间依赖性抑制剂，这类抑制作用更强且不可逆，临床风险更高。

转运体抑制试验（如P-gp）：评估候选药物对P-糖蛋白等外排转运体功能的抑制，预测其对底物药物吸收、分布和排泄的影响。

转运体底物特性鉴定：确定候选药物是否为特定转运体（如OATP1B1, BCRP）的底物，以评估其药动学可能受其他药物影响的程度。

血浆蛋白结合置换试验：研究候选药物是否能够将其他药物从血浆蛋白（主要是白蛋白和α1-酸性糖蛋白）结合位点上置换下来，可能导致后者游离浓度瞬时升高。

代谢稳定性测定：在肝微粒体或肝细胞中评估候选药物自身的代谢速率，为判断其是相互作用“ perpetrator”还是“victim”提供依据。

反应表型研究：鉴定负责候选药物代谢的主要CYP450酶，明确其代谢通路，从而精准预测可能发生的相互作用。

代谢物鉴定与活性评估：识别并评估主要代谢产物的生物活性，判断其是否参与或介导药物相互作用。

CYP450酶表型分型：使用特异性探针底物混合物，在一次实验中同时评估候选药物对多种主要CYP450酶的抑制潜力。

检测范围

细胞色素P450超家族：涵盖与人类药物代谢最相关的同工酶，包括CYP1A2, 2B6, 2C8, 2C9, 2C19, 2D6, 3A4/5等。

外排转运体：主要包括P-糖蛋白（P-gp/MDR1）、乳腺癌耐药蛋白（BCRP）以及多药耐药相关蛋白（MRP2）等。

摄取转运体：包括有机阴离子转运多肽（OATP1B1, OATP1B3）、有机阳离子转运体（OCT2）和有机阴离子转运体（OAT1, OAT3）等。

II相代谢酶：如尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（UGT）、磺基转移酶（SJianCeT）和N-乙酰转移酶（NAT）等介导的结合反应。

血浆蛋白结合位点：主要针对人血清白蛋白和α1-酸性糖蛋白的高亲和力结合位点进行研究。

肝微粒体与肝细胞系统：使用人、动物（如大鼠、犬）的肝微粒体、S9组分或原代肝细胞进行体外孵育实验。

重组酶系统：使用表达单一特定人CYP450或UGT酶的重组微粒体系统，用于反应表型等特异性研究。

Caco-2细胞模型：常用于评估药物肠道吸收及对P-gp等转运体介导的外排作用的影响。

转染细胞系：如过表达特定人转运体（如MDCKII-P-gp, HEK293-OATP1B1）的细胞，用于高特异性转运体研究。

临床相关浓度范围：检测通常在涵盖并超过预期临床治疗血浆浓度的范围内进行，以评估浓度依赖性效应。

检测方法

荧光底物法：使用可被特定CYP450酶代谢产生荧光产物的探针底物，通过荧光读数快速筛选酶抑制活性。

液相色谱-质谱联用法：作为金标准方法，通过LC-MS/MS定量检测探针底物的代谢产物生成量或原型药物的减少量，准确测定酶活性。

Cocktail探针底物法：将多个针对不同CYP450酶的探针底物混合孵育，通过LC-MS/MS同时定量多个代谢产物，实现高通量抑制筛选。

实时荧光定量PCR：用于测定原代肝细胞中CYP450或转运体mRNA的表达水平，评估药物的酶诱导潜力。

Western Blotting：用于检测原代肝细胞或组织样本中特定CYP450酶或转运体蛋白的表达量变化，验证诱导或抑制效应。

跨膜转运实验：在Transwell培养系统中，使用转染细胞或Caco-2细胞，双向测定药物的表观渗透系数和外排率，评估转运体影响。

平衡透析法/超滤法：用于测定药物的血浆蛋白结合率，并评估其他药物对其产生的置换作用。

时间依赖性抑制预孵育实验：先将候选药物与NADPH和酶系统预孵育，再加入探针底物，以鉴别机制性抑制。

酶动力学分析：通过测定不同底物浓度下的反应速率，计算Ki、IC50、Km、Vmax等参数，定量描述抑制强度或底物亲和力。

高内涵成像分析：结合荧光探针与自动化成像，在细胞水平可视化并定量分析转运体活性或酶活性的变化。

检测仪器设备

液相色谱-串联质谱仪：进行药物及其代谢产物定性与定量分析的核心高灵敏度设备。

多功能酶标仪：具备吸光度、荧光和化学发光检测功能，用于快速读取基于光学信号的微板检测结果。

实时荧光定量PCR仪：用于精确检测基因表达水平的变化，评估酶或转运体的诱导作用。

细胞培养系统：包括CO2培养箱、生物安全柜、倒置显微镜等，用于维持原代肝细胞、Caco-2细胞及转染细胞的培养。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。