沙门菌检测

检测项目

沙门菌检测涵盖以下核心项目：

定性检测：通过选择性培养基分离目标菌株，确认样本中是否存在沙门菌属微生物

定量分析：采用MPN法（最可能数法）测定单位体积样本中的活菌浓度

血清分型：基于Kauffmann-White分类体系进行O抗原和H抗原鉴定

耐药性测试：通过药敏试验评估菌株对β-内酰胺类、喹诺酮类等抗生素的敏感性

毒力基因筛查：利用PCR技术检测invA、spvC等特征性毒力因子

检测范围

沙门菌检测适用于以下领域：

食品行业：生鲜肉类（禽畜肉及副产品）、蛋制品（液态蛋/蛋粉）、乳制品（生乳/奶酪）、即食食品（沙拉/寿司）及饲料原料

医疗机构：患者粪便/血液样本的病原学诊断及院内感染溯源分析

环境监测：食品加工设备表面拭子、生产用水及冷链运输环节的生物污染评估

畜牧养殖：活体动物（家禽/生猪）肠道样本及屠宰环节的卫生监控

进出口检验：跨境贸易中动植物产品及食品添加剂的法定检疫项目

检测方法

现行主流检测技术体系包括：

传统培养法（ISO 6579:2017）

预增菌阶段：使用缓冲蛋白胨水（BPW）在37℃培养8-18小时

选择性增菌：分别采用Rappaport-Vassiliadis培养基（41.5℃）和Muller-Kauffmann四硫磺酸盐肉汤（37℃）进行双重增菌

平板分离：在XLD琼脂和Hektoen琼脂上划线培养24±3小时

生化验证：通过TSI斜面试验、赖氨酸脱羧酶试验及尿素酶试验完成初步鉴定

实时荧光PCR法（ISO/TS 6579-2:2012）

靶标基因：特异性扩增ttrRSBCA操纵子序列（位于沙门菌属保守区）

核酸提取：采用磁珠法或离心柱法获取高质量DNA模板

反应体系：包含TaqMan探针及引物对（F:5'-CGTCGTTACGGTATCGCA-3', R:5'-TGCGGTAATGTGTGAAAGGTG-3'）

扩增条件：95℃预变性10min后进入45个循环（95℃15s→60℃60s）

酶联免疫吸附法（ELISA）

包被抗体：针对沙门菌鞭毛蛋白或外膜蛋白的单克隆抗体

显色系统：HRP标记二抗与TMB底物反应产生450nm吸光度信号

灵敏度阈值：可检出10³-10⁴ CFU/mL的菌悬液样本

全自动微生物鉴定系统

数据库匹配：基于VITEK 2 GN卡或BD Phoenix™ PMIC板的生化反应图谱分析

鉴定周期：4-18小时完成种水平鉴定（准确率≥95%）

全基因组测序（WGS）技术

测序平台：Illumina NovaSeq 6000或Oxford Nanopore MinION

数据分析：通过MLST分型、SNP聚类及质粒携带基因分析实现分子溯源

检测仪器

标准实验室需配备以下关键设备：

实时荧光PCR仪（如ABI QuantStudio 5）：具备多通道荧光检测功能，支持高通量快速筛查

全自动酶标仪（如BioTek Synergy H1）：集成震荡孵育与多波长读取模块的ELISA专用设备

微生物质谱仪（如Bruker MALDI-TOF MS）：通过核糖体蛋白指纹图谱实现快速种属鉴定

脉冲场电泳系统（如Bio-Rad CHEF Mapper）：用于PFGE分型分析的标准化设备组套

生物安全柜（Class II A2型）：符合NSF/ANSI 49标准的样品前处理防护装置

恒温培养箱组套：包含25℃±1℃、37℃±1℃及42℃±0.5℃多温区控制单元

全自动微生物鉴定药敏系统（如梅里埃VITEK 2 Compact）：集成比浊计与比色计的智能化分析平台

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。