双染色检测

北检院检测中心  |  完成测试:  |  2025-07-01  

双染色检测是一种显微技术分析手段,通过两种特异性荧光染料标记不同靶标,实现组织或细胞样本中多目标结构的同步可视化与精确定位。该检测的关键在于染料光谱分离度、染色特异性控制及共定位定量分析,为病理诊断和细胞生物学研究提供高分辨率形态学依据。

注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试望见谅。

检测项目

核质定位分析:采用DAPI/Hoechst标记细胞核(激发波长358nm/发射波长461nm),同步检测胞质内靶蛋白(如FITC标记Cy3,Ex495nm/Em517nm)

膜受体共表达检测:CD3(PE通道,Ex565nm/Em578nm)与CD19(APC通道,Ex650nm/Em660nm)双染色验证淋巴细胞亚群

细胞凋亡判定:Annexin V-FITC(凋亡早期,Ex488nm/Em530nm)联合PI(坏死晚期,Ex535nm/Em617nm)荧光强度比值分析

神经突触标记:PSD-95(Alexa Fluor 488,Ex499nm/Em520nm)与Synaptophysin(Cy5,Ex649nm/Em670nm)共定位系数≥0.85

线粒体-内质网关联:MitoTracker Red CMXRos(Ex579nm/Em599nm)与ER-Tracker Green(Ex504nm/Em511nm)空间距离测量精度±0.2μm

细胞周期同步分析:EdU(Click-iT 647,Ex650nm/Em665nm)与DNA染料DRAQ5(Ex646nm/Em697nm)S期判定误差≤3%

病原体宿主互作:病原体表面抗原(TRITC,Ex557nm/Em576nm)与宿主TLR4(FITC,Ex494nm/Em518nm)结合位点密度检测

血管生成研究:CD31(PE-Cy7,Ex785nm/Em805nm)与α-SMA(FITC)双染计算微血管密度(MVD≥5/HPF)

自噬体标记:LC3B(Alexa Fluor 488)与LAMP1(Cy3)共定位率检测(阈值>60%)

细胞骨架共显影:Phalloidin-iFluor 594(肌动蛋白,Ex594nm/Em614nm)与Tubulin Tracker Green(微管蛋白,Ex488nm/Em520nm)结构重叠分析

肿瘤干细胞鉴定:CD44(APC,Ex650nm/Em660nm)与CD133(PE,Ex565nm/Em578nm)双阳性细胞占比检测

检测范围

癌症病理诊断:FFPE组织切片中HER2(Cy3)与Ki-67(FITC)同步染色指导乳腺癌分型

神经退行性疾病研究:脑切片β-淀粉样斑块(Thioflavin S)与Tau蛋白(AT8抗体)共沉积分析

免疫细胞分型:流式细胞术检测外周血CD4+/CD25+调节性T细胞双标记

药物作用机制:抗癌药物处理后BCL-2(Cy5)与Caspase-3(FITC)表达相关性研究

干细胞分化追踪:OCT4(TRITC)与SOX2(FITC)多能性标志物共表达监测

病原体感染定位:肺组织流感病毒NP蛋白(Alexa Fluor 647)与肺泡上皮细胞(E-cadherin-FITC)共聚焦成像

转基因植物检测:GUS报告基因(X-Gluc染色)与DsRed荧光蛋白(Ex558nm/Em583nm)共表达验证

骨组织再生评估:骨钙素(OCN-Cy5)与胶原蛋白I(FITC)新生骨基质共分布检测

心血管病理分析:心肌梗死区域纤维蛋白(FITC)与巨噬细胞(CD68-PE)浸润相关性研究

纳米药物递送:量子点标记药物(QD705,Em705nm)与细胞核(DAPI)摄取效率定量

检测标准

ISO 10993-5:2009 医疗器械生物学评价-细胞毒性试验双染色法

GB/T 39769-2021 流式细胞术双色分析通用要求

ASTM F2944-2012 荧光共定位分析标准指南

ISO 19001:2018 病理学免疫荧光双染技术规范

GB/T 38483-2020 细胞凋亡检测指南(Annexin V/PI法)

CLSI H43-A2 流式细胞术免疫表型分析标准

ISO 20391-1:2018 细胞计数实验设计规范(含双标验证)

GB/T 40973-2021 生物样本荧光染色通用要求

ASTM E1492-2011 荧光光谱特性测量标准

ISO 18846:2016 生物技术细胞活力测定(双染色法)

检测仪器

激光共聚焦显微镜:配备405/488/561/640nm四激光器,实现≤5nm光谱分辨率的多通道同步扫描及三维重构

多光谱流式细胞仪:配置8探测器阵列,支持PE-Cy7/APC-Cy7等串联染料补偿,同时解析12色荧光信号

全自动玻片扫描系统:集成20×/40×/100×油镜,通过多波段滤光片实现双染切片全景数字化(分辨率0.25μm/像素)

荧光寿命成像系统(FLIM):基于时间相关单光子计数(TCSPC),检测FRET效率(精度±0.1ns)验证蛋白互作

高通量细胞成像分析仪:搭载环境控制模块,支持活细胞双染动态监测(时间分辨率15秒/帧)

超分辨显微镜(STORM):采用光激活定位技术(PALM),实现双色标记样本的20nm空间分辨率成像

微孔板荧光检测仪:配备双光栅单色器(波长精度±1nm),同步检测96孔板FITC/TRITC荧光强度

冷冻切片荧光适配系统:集成帕尔贴温控平台(-30℃±0.5℃),保障低温环境下双染样本稳定性

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验,获取相关数据资料;

出具检测报告。

北检(北京)检测技术研究院
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