脂肪褐变UCP1检测检测

检测项目

UCP1蛋白表达量测定：采用WesternBlot技术定量分析，检测参数包括抗体特异性验证（效价1:1000）、灰度值分析（ImageJ软件）

线粒体膜电位检测：应用JC-1荧光探针法，参数包含红/绿荧光强度比（激发波长514nm）、电位变化速率（ΔΨm/min）

脂肪酸氧化率测定：通过放射性同位素标记法，检测14C-棕榈酸转化为CO₂的转化率（精度0.5nmol/g/h）

产热能力评估：使用间接热量测定系统，参数包括耗氧量（VO₂）、二氧化碳排出量（VCO₂）及呼吸交换率（RER）

基因表达分析：RT-qPCR检测Ucp1mRNA水平，内参基因选用β-actin，扩增效率控制在90-110%

线粒体DNA拷贝数：SYBRGreen实时定量检测mtDNA/核DNA比值，引物退火温度设定58℃

细胞能量代谢分析：Seahorse技术测定基础耗氧率（OCR）和最大呼吸能力，数据采集间隔3分钟

脂滴形态学观察：尼罗红染色结合共聚焦显微镜，参数包括脂滴平均直径（0.5-10μm）、分布密度（个/100μm）

游离脂肪酸浓度：比色法检测血清FFA含量，线性范围0.1-2.0mmol/L

甘油三酯水解率：荧光底物法测定脂肪酶活性，温度控制370.2℃

检测范围

白色脂肪组织样本：腹部皮下脂肪、内脏脂肪等哺乳动物脂肪活检组织

棕色脂肪细胞模型：原代培养细胞、3T3-L1诱导分化体系

基因编辑动物模型：UCP1敲除/过表达小鼠的脂肪组织样本

体外分化脂肪细胞：人间充质干细胞定向分化体系

冷暴露实验样本：4℃环境暴露72小时动物脂肪组织

β3肾上腺素受体激动剂处理样本：CL316243药物干预模型

代谢疾病模型：II型糖尿病小鼠脂肪组织标本

能量代谢研究：运动干预前后脂肪组织对比样本

产热功能评估：不同温度适应期动物脂肪样本

药物筛选模型：小分子化合物处理的脂肪细胞系

检测标准

ISO9001:2015质量管理体系在检测流程中的应用

ISO/IEC17025:2017实验室能力验证规范

GB/T27417-2017合格评定化学分析方法验证程序

GB/T27404-2008实验室质量控制规范

ASTME2935-13实时荧光定量PCR标准方法

CLSIEP05-A3精密度验证方案

OECETG456体外细胞毒性测试指南

ICHQ2(R1)分析方法验证技术要求

USP通则中生物样品处理规范

AOAC999.03脂肪酸氧化测定标准方法

检测仪器

多功能酶标仪：波长范围200-1000nm，支持荧光、化学发光检测模式

实时荧光定量PCR仪：具备熔解曲线分析功能，温控精度0.1℃

激光共聚焦显微镜：配备405/488/561/640nm四激光通道

高效液相色谱系统：C18反相色谱柱，紫外检测器波长范围190-900nm

超速离心机：最大转速150000g，温度控制范围4-40℃

细胞能量代谢分析仪：同步检测耗氧率（OCR）和细胞外酸化率（ECAR）

红外热成像系统：温度分辨率0.03℃，空间分辨率640480像素

流式细胞仪：配置488nm和640nm双激光系统

微量呼吸测量系统：氧电极灵敏度0.1nmolO₂/mL

全自动蛋白印迹系统：完成转膜、封闭、显色全流程自动化

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。