病毒载量检测

检测项目

病毒核酸定量：采用TaqMan探针法，检测范围10²~10⁹ copies/mL，RSD≤5%

检测限值验证：通过梯度稀释确定最低检出限，LoD≤20 IU/mL

动态范围验证：验证标准曲线线性范围，R²≥0.998

精密度分析：批内CV≤5%，批间CV≤8%

特异性验证：确保与近源病毒无交叉反应，特异性≥99%

抑制物检测：内参基因Ct值偏移≤1.5循环

样本稳定性：评估不同保存温度下(-80℃/4℃/室温)72h内降解率≤10%

提取效率验证：加标回收率≥90%

引物探针验证：熔解曲线分析Tm值偏差≤1℃

扩增效率评估：标准曲线斜率-3.6~-3.1，对应效率90%~110%

室内质控：包含弱阳性(2~3倍LoD)、中值、阴性对照

交叉污染监控：每批次设置阴性样本≥10%

检测范围

临床样本：血清/血浆样本采用EDTA抗凝管采集，检测限≤50 copies/mL

呼吸道样本：鼻咽拭子保存于病毒运输液(VTM)，采样量≥1mL

脑脊液样本：无菌采集0.5mL，需离心去除细胞碎片

组织活检样本：石蜡包埋组织需脱蜡处理，新鲜组织采用液氮研磨

细胞培养上清：接种后72h内取样，避免反复冻融

环境样本：物体表面采样面积10×10cm²，使用无菌拭子湿润采样

污水样本：采用PEG浓缩法，浓缩倍数≥100倍

血液制品：血浆制品检测需DNase预处理去除游离DNA

疫苗原液：添加Triton X-100裂解病毒包膜

实验动物样本：小鼠肺组织匀浆采用0.5mm研磨珠处理

冷冻干燥样本：复溶液体积与原始体积误差≤5%

法医样本：陈旧样本需增加扩增循环数至45 cycles

检测标准

ISO 15189:2022《医学实验室质量和能力要求》

ISO/IEC 17025:2017《检测和校准实验室能力通用要求》

WS/T 683-2020《新型冠状病毒核酸检测标准》

YY/T 1596-2017《甲型流感病毒核酸检测试剂盒》

EP17-A2《临床检验方法检出能力评价》

GB/T 37871-2019《核酸检测试剂盒质量评价技术规范》

GB 19489-2008《实验室生物安全通用要求》

CLSI EP05-A3《定量测量程序的精密度性能评价》

CLSI EP12-A2《定性检测性能评价》

FDA《病毒载量检测试剂性能验证指南》

YY/T 1223-2014《血浆(清)总RNA提取试剂盒》

PCR实验室建设规范WS 233-2017

检测仪器

实时荧光定量PCR仪：配置5通道光学系统，温控精度±0.2℃，支持多重靶标检测

全自动核酸提取仪：磁珠法通量1~96样本/批次，提取效率≥95%

超微量分光光度计：检测范围2~7500 ng/μL，分辨率0.2 ng/μL

生物安全柜：A2型二级防护，进风风速0.53 m/s±10%

超低温冷冻离心机：最大转速15000 rpm，温控范围-20℃~40℃

梯度PCR仪：温度均一性±0.5℃，升降温速率≥4℃/秒

微滴式数字PCR系统：分区数20000个/样本，绝对定量精度±10%

自动化液体处理工作站：移液精度CV≤1.5%，支持96/384孔板操作

恒温金属浴：控温范围30~100℃，温度波动±0.5℃

电化学发光免疫分析仪：检测灵敏度0.1 pg/mL，动态范围6个数量级

纳米孔测序仪：单次运行产出30 Gb，读长>10 kb

冷冻研磨仪：震荡频率0~70 Hz，适配2 mL离心管

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。