体外基因编辑检测

检测项目

基因编辑效率测定：通过NGS定量目标位点插入/缺失频率，检测灵敏度0.1%变异等位基因

脱靶效应全基因组扫描：采用GUIDE-seq或CIRCLE-seq技术定位非特异性切割位点，分辨率达单碱基水平

编辑特异性验证：运用T7E1酶切错配检测，可识别≥5%的indel频率

HDR/NHEJ通路分析：通过荧光报告系统量化同源定向修复与非同源末端连接效率

细胞活性与毒性检测：CCK-8法测定细胞增殖抑制率，精度±3%

载体残留量检测：qPCR定量质粒骨架序列，检测限达10拷贝/μg基因组DNA

目标蛋白表达验证：Western Blot定量靶蛋白表达量，采用化学发光法检测下限1pg

表型功能分析：流式细胞术检测荧光标记效率，分辨率>99%

单细胞克隆编辑验证：微流控分选后进行单细胞扩增测序

表观遗传修饰检测：Bisulfite测序分析甲基化模式变化，覆盖度≥30X

核酸二级结构预测：使用mFold软件评估gRNA自由能，阈值设定ΔG≤-10kcal/mol

编辑持续性监测：长期传代培养跟踪编辑稳定性，最长周期60天

检测范围

CRISPR-Cas系统载体：包括质粒、慢病毒、AAV等递送载体的编辑效率验证

TALEN基因编辑试剂：检测锌指核酸酶介导的靶向修饰精度

碱基编辑工具：验证C→T或A→G单碱基转换的准确性

Prime编辑系统：检测靶向插入缺失及点突变效率

细胞治疗产品：CAR-T等治疗用细胞的基因组修饰安全性评价

基因工程模式生物：转基因小鼠/斑马鱼的种系编辑验证

体外转录mRNA药物：LNP包裹mRNA的编辑活性检测

农业育种材料：作物基因组定向修饰的农艺性状关联分析

微生物基因回路：合成生物学元件的逻辑门功能验证

基因诊断试剂盒：编辑酶介导的核酸检测体系性能验证

类器官模型：肠道/脑类器官的基因功能修复效果评估

基因治疗病毒载体：重组腺相关病毒载体整合位点分析

检测标准

ISO 20399:2017 生物技术-核酸靶向修饰检测通则

ASTM E3132-18 基因编辑系统脱靶效应评估标准指南

GB/T 38791-2020 基因编辑产品脱靶效应检测指南

ISO/IEC 17025:2017 检测实验室通用要求

GB/T 37872-2019 核酸靶向操作技术规范

ICH S6(R1) 生物技术药品临床前安全性评价

USP<1047> 基因治疗产品检测通则

EP 2.6.34 基因修饰细胞产品检测方法

GB/T 38505-2020 基因编辑工具活性检测方法

ISO 21976:2020 分子生物学检测用参照物质要求

检测仪器

Illumina NovaSeq 6000测序系统：执行深度全基因组测序，通量8Tb/run，用于脱靶效应全景扫描

Beckman CytoFLEX流式细胞仪：13激光配置检测荧光蛋白表达，分辨率0.1μm，完成细胞表型定量

Agilent 4150 TapeStation系统：自动化电泳分析gRNA纯度，灵敏度5pg/μl，确保编辑工具质量

Applied Biosystems QuantStudio 7 Pro：四色通道qPCR仪，执行载体拷贝数检测，动态范围10^9

NanoString GeoMx DSP空间多组学平台：原位分析编辑区域蛋白表达空间分布，检测1700+蛋白靶标

Bio-Rad QX200微滴式数字PCR系统：绝对定量低频编辑事件，检测限0.001%变异频率

PerkinElmer Opera Phenix高内涵成像系统：自动扫描细胞形态变化，通量50板/日，完成细胞毒性评估

Oxford Nanopore PromethION：实时长读长测序检测结构变异，读长>100kb，解析复杂基因组重排

Thermo Orbitrap Exploris 480质谱仪：高精度蛋白质组分析，分辨率480,000@m/z200，验证编辑后蛋白功能

Sony SH800细胞分选仪：无菌分选单细胞克隆，分选速度25,000细胞/秒，建立单克隆编辑细胞系

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。