冻品志贺氏菌PCR检测

检测项目

样品采集：规范冻品样品的采集方法和保存条件，确保样品代表性和完整性，避免交叉污染和降解，为后续检测提供可靠基础。

DNA提取：使用专用试剂盒或方法从冻品中提取高质量DNA，去除抑制剂和杂质，确保模板纯净度，满足PCR扩增要求。

引物设计：针对志贺氏菌特异性基因序列如ipaH基因设计引物，优化序列长度和退火温度，保证扩增的特异性和效率。

PCR扩增：在热循环设备中进行DNA扩增，设置变性、退火和延伸温度参数，实现目标基因片段的特异性复制。

凝胶电泳：通过琼脂糖凝胶分离PCR产物，利用电场迁移可视化DNA条带，初步判断扩增结果和片段大小。

实时荧光检测：采用荧光探针或染料实时监测PCR扩增过程，定量分析志贺氏菌DNA浓度，提升检测准确性和灵敏度。

阳性对照设置：使用已知志贺氏菌菌株作为对照，验证PCR反应体系的有效性，确保检测过程的可靠性和重复性。

阴性对照设置：设置无模板反应对照，排除环境污染和试剂干扰，保证检测结果的特异性和真实性。

灵敏度测试：评估检测方法的最低检测限，确定能可靠检测的志贺氏菌最低浓度，优化检测参数。

特异性测试：验证引物对其他常见细菌无交叉反应，确保检测仅针对志贺氏菌，避免假阳性结果。

检测范围

冷冻肉类：包括牛肉、猪肉和禽肉等，在加工和储存过程中可能污染志贺氏菌，需检测以确保食用安全和合规性。

冷冻海鲜：如鱼类、虾类和贝类，易通过水源或加工环境感染病原体，检测可预防食源性疾病传播。

冷冻蔬菜：绿叶蔬菜和根茎类产品，可能因土壤或灌溉水污染志贺氏菌，需进行微生物安全筛查。

冷冻水果：浆果和热带水果等，冷冻后仍可能存在微生物风险，检测保障消费者健康。

冷冻乳制品：冰淇淋和奶酪等产品，志贺氏菌污染可导致腐败和健康隐患，必须定期监测。

冷冻即食食品：预 cooked meals和沙拉等，直接食用且无需加热，微生物检测至关重要。

冷冻烘焙产品：面包和糕点等，原料或加工环节可能引入污染，检测确保产品质量。

冷冻调味品：酱料和香料等配料，作为食品组成部分，需验证无病原体存在。

冷冻宠物食品：狗粮和猫粮等，志贺氏菌可能影响动物福利，检测提升安全标准。

冷冻食品包装材料：直接接触食品的包装表面，可能成为污染载体，需进行微生物评估。

检测标准

ISO 21567:2004：食品和动物饲料微生物学 — 志贺氏菌属检测的水平方法，规定了样品制备、增菌和确认测试的步骤和要求。

GB/T 4789.5-2012：食品微生物学检验 志贺氏菌检验，中国国家标准，详细描述了志贺氏菌的检测程序、鉴定方法和结果 interpretation。

ISO 7218:2007：食品和动物饲料微生物学 — 测试的一般要求和指南，涵盖实验室条件、样品处理和质量保证方面。

GB/T 27405-2008：实验室质量控制规范 食品微生物检测，规定检测过程中的质量控制和验证程序。

检测仪器

PCR仪：热循环设备，通过精确控制温度变化驱动DNA扩增反应，在本检测中用于志贺氏菌特异性基因的扩增和复制。

离心机：高速旋转分离设备，用于样品均质化和DNA提取过程中的细胞破碎和核酸沉淀，确保模板纯净。

电泳仪：提供电场使DNA片段在凝胶中迁移的装置，用于分析PCR产物大小和确认扩增特异性，辅助结果判断。

紫外透射仪：发射紫外光可视化凝胶中DNA条带的设备，用于检测PCR扩增结果和进行条带密度分析。

微量分光光度计：测量核酸溶液浓度和纯度的仪器，确保提取的DNA质量符合PCR要求，避免抑制剂影响。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。