蕲蛇的成分及含量检测

检测样品的基本信息

本品卷呈圆盘状，盘径17～34cm，体长可达2m。头在中间稍向上，呈三角形而扁平，吻端向上，习称“翘鼻头”。上腭有管状毒牙，中空尖锐。背部两侧各有黑褐色与浅棕色组成的“V”形斑纹17～25个，其“V”形的两上端在背中线上相接，习称“方胜纹”，有的左右不相接，呈交错排列。腹部撑开或不撑开，灰白色，鳞片较大，有黑色类圆形的斑点，习称“连珠斑”；腹内壁黄白色，脊椎骨的棘突较高，呈刀片状上突，前后椎体下突基本同形，多为弯刀状，向后倾斜，尖端明显超过椎体后隆面。尾部骤细，末端有三角形深灰色的角质鳞片1枚。气腥，味微咸。

检测范围

蕲蛇酶、蕲蛇酶时间、蕲蛇、蕲蛇酒、蕲蛇酿、蕲蛇醇注射液、蕲蛇风湿酒、蕲蛇药酒、解毒蕲蛇丸、蕲蛇追风酒、蕲蛇酶、蕲蛇酶时间、蕲蛇、蕲蛇酒、蕲蛇酿、蕲蛇醇注射液、蕲蛇风湿酒、蕲蛇药酒、解毒蕲蛇丸、蕲蛇追风酒、蕲蛇酶注射液、李时珍、再造丸、回天再造丸、回生再造丸、大活络丸、人参再造丸、大活络丹、活络丸、同仁大活络丸、山白菊、含毒性药材中成药转换为非处方药评价处理原则、风湿祛痛胶囊、大洛络丸、百步蛇、白鹿洞方、补药酒、还童酒、解热除毒丸、五蛇酒、蕲蛇等。

参考检测方法

部分参考标准

《中国药典》2022年版

GB/T 41277-2022中药材(植物药)新品种评价技术规范

GB 6265-1986 中药材压缩打包运输包装件

GB/T 31773-2015 中药方剂编码规则及编码

样品鉴别方法

聚合酶链式反应法。 模板DNA提取取本品0.5g，置乳钵中，加液氮适量，充分研磨使成粉末，取0.1g，置1.5ml离心管中，加入消化液275μl[细胞核裂解液200μl，0.5mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液50μl，蛋白酶K（20mg/ml）20μl，RNA酶溶液5μl]，在55℃水浴保温1小时，加入裂解缓冲液250μl，混匀，加到DNA纯化柱中，离心（转速为每分钟10000转）3分钟；弃去过滤液，加入洗脱液800μl[5mol/L醋酸钾溶液26μl，1mol/LTris-盐酸溶液（pH7.5）18ml，0.5mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液（pH8.0）3μ1，无水乙醇480μl，灭菌双蒸水273μl]，离心（转速为每分钟10000转）1分钟；弃去过滤液，用上述洗脱液反复洗脱3次，每次离心（转速为每分钟10000转）1分钟；弃去过滤液，再离心2分钟，将DNA纯化柱转移入另一离心管中，加入无菌双蒸水100μl，室温放置2分钟后，离心（转速为每分钟10000转）2分钟，取上清液，作为供试品溶液，置零下20℃保存备用。另取蕲蛇对照药材0.5g，同法制成对照药材模板DNA溶液。 PCR反应鉴别引物5'GGCAATTCACTACACAGCCAA-CArCAACT3'和5'CCATAGTCAGGTGGTTAGTGATAC3'。PCR反应体系：在2004离心管中进行，反应总体积为25μl，反应体系包括10×PCR缓冲液2.5μl，dNTP（2.5mmol/L）2ml，鉴别引物（10μmol/L）各0.5μl，高保真TaqDNA聚合酶（5U/ml）0.2μl，模板0.5μl，无菌双蒸水18.8μl。将离心管置PCR仪，PCR反应参数：95℃预变性5分钟，循环反应30次（95℃30秒，63℃45秒），延伸（72℃）5分钟。 电泳检测照琼脂糖凝胶电泳法方法2（通则0541），胶浓度为1%，胶中加入核酸凝胶染色剂GelRed；供试品与对照药材PCR反应溶液的上样量分别为8ml，DNA分子量标记上样量为2μl（0.5μg/μl）。电泳结束后，取凝胶片在凝胶成像仪上或紫外透射仪上检视。供试品凝胶电泳图谱中，在与对照药材凝胶电泳图谱相应的位置上，在300～400bp应有单一DNA条带。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。

北检研究院的服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。