致病性嗜水气单胞菌的检验方法检测

检测项目

样本预处理：采用无菌均质法处理固体样品，加样量25g/225mL碱性蛋白胨水，振荡频率200rpm×30min。

选择性增菌：使用APW培养基（pH8.6±0.2），37℃培养24±2h，浑浊度≥0.5麦氏单位判定阳性。

分离培养：划线接种RS培养基，30℃培养48h，典型菌落特征为黄色中心、半透明边缘，直径1-2mm。

革兰氏染色镜检：需满足革兰阴性短杆菌（0.3-1.0×1.0-3.5μm）、极端单鞭毛形态学标准。

氧化酶试验：菌落滴加1%四甲基对苯二胺，30秒内呈深紫色为阳性反应。

生化鉴定：包括葡萄糖发酵（产酸不产气）、吲哚试验（Kovacs试剂显红色）、VP试验（红色为阴性）等15项指标。

溶血活性检测：5%羊血琼脂平板，37℃×24h，β溶血环直径＞2mm为强毒株特征。

毒力基因PCR：扩增aerA（气溶素基因）、ahpA（溶血素基因）等靶点，产物长度分别为352bp/421bp。

血清学分型：玻片凝集试验，覆盖O11、O16、O34等9种主要血清型。

药敏试验：纸片扩散法测试氨苄西林（10μg）、氟苯尼考（30μg）等12种抗生素，抑菌圈判读依据CLSI标准。

检测范围

养殖水产品：鱼类（鲤科为主）、甲壳类（虾、蟹）等水产动物组织及体表黏液样本。

水产养殖环境：池塘水体（采样深度0.5m）、底泥（表层5cm）及过滤系统生物膜。

鲜活水产品：市售活鱼鳃丝、肠道内容物及肌肉组织冻存样本。

冷冻加工食品：即食鱼糜制品、冷冻虾仁等-18℃储运产品解冻液检测。

动物饲料：鱼粉、肉骨粉等蛋白原料，检测限≥10CFU/g。

临床样本：创伤感染组织渗出液、败血症患者血培养阳性标本。

水源监测：饮用水处理厂出厂水、管网末梢水（滤膜法浓缩100mL）。

水生观赏动物：热带鱼体表溃疡拭子、两栖类皮肤病灶组织。

疫苗生产质控：灭活疫苗半成品杂菌检验，需无菌操作验证。

科研样本：实验动物（斑马鱼）攻毒后肝脾组织匀浆液。

检测标准

GB/T26428-2010饲料中嗜水气单胞菌检测方法

GB4789.28-2013培养基和试剂质量要求

ISO21872-1:2017食物链微生物学-潜在肠道致病性弧菌属检测

SN/T1870-2016出口食品中致病菌荧光PCR检测方法

APHA9215E标准方法-水中气单胞菌计数（膜过滤法）

FDABAMChapter28水产品病原微生物分析指南

WS/T234-2002病原微生物实验室生物安全规范

GB/T38502-2020消毒剂实验室杀菌效果检验方法

检测仪器

生化鉴定系统：全自动微生物分析仪，完成API20E试条判读，可鉴定98%气单胞菌属菌株。

PCR扩增仪：实时荧光定量模块，支持熔解曲线分析，检测灵敏度达10²CFU/mL。

恒温培养箱：三气调控型（O₂/CO₂/N₂），温度波动度±0.5℃，满足嗜温菌生长需求。

微生物过滤装置：47mm孔径0.45μm滤膜，配合真空泵实现100mL水样病原富集。

全自动血培养仪：连续监测培养瓶内CO₂浓度变化，阳性报警时间≤12h。

生物安全柜：A2型二级防护，保障BSL-2级病原操作安全。

菌落计数器：LED暗背景照明，0.1mm精度菌落直径测量。

电泳系统：水平琼脂糖电泳槽，恒压90V×40min完成PCR产物分离。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。