玉米褐条霜霉病菌鉴定检测

检测项目

病原菌分离培养、孢子囊形态观测、游动孢子活性测定、卵孢子染色鉴定、寄主专化性测试、致病性验证、ITS序列分析、COI基因扩增、β-tubulin基因测序、SSR分子标记开发、LAMP特异性检测、实时荧光定量PCR、免疫层析试纸条验证、细胞壁几丁质含量测定、脂肪酸甲酯谱分析、全基因组测序组装、系统发育树构建、抗药性基因筛查、菌丝生长速率测定、产孢量统计、温度敏感性试验、pH适应性测试、杀菌剂敏感性评估、土壤带菌量检测、种子表面消毒验证、病斑扩展动态监测、叶鞘侵染程度分级、根系侵染显微观察、气传孢子捕捉计数、病株残体降解跟踪。

检测范围

玉米幼苗叶片基部渗出液、叶鞘褐变组织块茎秆维管束切片种子胚乳分离物土壤浸出液悬浮液灌溉水沉淀物田间病株残体粉碎样气传孢子捕捉膜玉米须根表皮刮取物穗轴木质部提取液雄花絮孢粉样本近缘杂草假高粱根际土玉米杂交种亲本材料仓储玉米表层附着物农用器械擦拭棉签育苗基质浸提液雨水径流沉淀物昆虫介体消化道内容物有机肥腐熟样品滴灌系统滤膜截留物转基因玉米愈伤组织人工接种对照样本病田周边禾本科植物叶片。

检测方法

孢子囊离析法采用2%KOH溶液处理病组织12小时，400倍相差显微镜下测量20个成熟孢子囊的长宽比及乳突特征；巢式PCR使用外引物SclF1/SclR1(5'-CTACCTGAACGCGATTGA-3'/5'-GTTCAAGACGGGTTCTTG-3')进行首轮扩增后，以内引物SclF2/SclR2(5'-GCGATTGACCCAGTATT-3'/5'-GGTTCTTGGTCGTGATG-3')进行二次扩增；LAMP快速检测体系包含FIP/BIP特异性引物组，在65℃恒温条件下通过浊度仪实时监测Mg+沉淀量变化；全自动孢子捕捉器连续72小时采集气传孢子，经CalcofluorWhite荧光染色后利用图像识别软件统计特征性卵圆形孢子占比。

检测标准

GB/T28068-2011玉米霜霉病检疫鉴定方法
ISPM27-2006限定性有害生物诊断协议
EPPOPM7/120(1)Sclerophthorarayssiae诊断规程
NY/T1213-2020农作物病害分子检测技术规范
SN/T5559-2022植物检疫卵菌纲病原菌分离培养技术准则
ISO21571:2005食品与饲料中微生物DNA提取方法
APFIS3021-D-2018跨境植物病原卵菌分子标记库建设指南
JCM0007-2020植物病原菌全基因组测序分析流程
AOAC2017.09LAMP法植物病原现场快速检测认证程序
FERAPP001/02卵菌抗药性表型测定标准操作流程。

检测仪器

冷冻切片机用于制备10μm厚度的叶鞘横切面样本；全自动显微成像系统配备微分干涉对比模块实现孢子囊三维结构重建；梯度PCR仪运行Touchdown程序降低非特异性扩增；纳米孔测序仪MinION完成田间样本宏基因组快速分析；激光共聚焦显微镜观测CalcofluorWhite标记的菌丝隔膜结构；超高效液相色谱串联质谱系统测定病菌特征性甾醇代谢产物；全自动酶标仪读取ELISA板450nm处吸光值；便携式恒温荧光检测仪执行LAMP反应实时监控；冷冻离心机在4℃条件下保持DNA提取过程中核酸完整性；智能型人工气候箱精确控制温度波动0.5℃完成病菌培养。

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。