mptp小鼠造模检测

北检院检测中心  |  完成测试:  |  2025-07-01  

本文系统阐述MPTP小鼠造模检测的核心流程与规范要求,涵盖神经毒性模型构建的关键检测指标、适用研究领域、标准化操作流程及专用设备配置。重点解析多巴胺能神经元损伤评价体系,为帕金森病机制研究提供标准化技术支撑。

注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试望见谅。

检测项目

自主活动度测定:通过旷场实验评估运动总量,记录5分钟内水平移动距离(单位:cm)及直立次数

旋转行为测试:阿朴吗啡诱导旋转计数,记录30分钟内同向旋转圈数(阈值≥7圈/分钟)

纹状体多巴胺含量:HPLC-ECD检测单胺类递质,检测限0.1pg/mg组织,线性范围0.5-100ng/mL

酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化:黑质致密部阳性神经元计数,切片厚度20μm,抗体稀释比1:500

胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达:星形胶质细胞活化评估,图像分析阳性面积占比(精度0.1%)

超氧化物歧化酶(SOD)活性:黄嘌呤氧化酶法测定,单位U/mg prot,温度控制37±0.5℃

丙二醛(MDA)含量:硫代巴比妥酸法检测,波长532nm,标准曲线R²>0.99

线粒体复合物I活性:分光光度法测定NADH氧化速率,反应温度30℃,单位nmol/min/mg蛋白

α-突触核蛋白聚集:Western Blot定量,SDS-PAGE胶浓度12%,上样量30μg/孔

小胶质细胞激活标志物(Iba-1):免疫荧光双标定量,共聚焦Z轴层厚1μm,激发波长488/594nm

黑质神经元凋亡率:TUNEL法检测,DAPI复染计数,凋亡细胞判定标准为核碎裂≥3片

血脑屏障通透性:伊文思蓝渗出量测定,静脉注射2%溶液4mL/kg,组织萃取液检测波长620nm

检测范围

帕金森病机制研究:神经退行性病变进程的动态评估模型

神经保护药物筛选:多巴胺能神经元存活率的药效学评价

基因修饰动物模型验证:转基因小鼠帕金森表型确认

氧化应激通路分析:自由基损伤与抗氧化系统相互作用研究

神经炎症反应监测:胶质细胞激活与细胞因子级联效应评估

线粒体功能障碍研究:呼吸链复合物活性与能量代谢检测

运动障碍行为学分析:基底神经节环路功能定量评价

神经毒性物质比较:环境毒素与MPTP作用机制对照研究

干细胞移植治疗:移植细胞存活与神经整合效果评价

神经影像学标记物验证:PET/MRI影像特征与病理对照

肠道菌群-脑轴研究:迷走神经介导的神经免疫调控模型

昼夜节律影响评估:运动症状昼夜波动规律观测

检测标准

ISO 10993-22:2017医疗器械生物学评价-神经毒性研究指南

GB/T 35823-2018实验动物动物神经行为学测试规范

NIH Publication No. 15-8008:神经疾病模型操作手册

ASTM F2721-09神经组织学切片制备标准规程

GB/T 39759-2021实验动物生化指标检测通则

OECD TG 424神经毒性重复剂量试验指南

AAALAC国际认证动物行为学设施管理规范

GB 14925-2010实验动物环境及设施技术要求

JIS K 3850-1:2006空气悬浮粒子神经毒性评价方法

EN ISO 19001神经组织免疫组化染色质控规范

检测仪器

动物行为视频分析系统:采用EthoVision XT 15.0软件,可同步追踪12只小鼠三维运动轨迹,空间分辨率0.1mm

高效液相色谱-电化学检测器:配置C18反相色谱柱(150×4.6mm, 5μm),工作电压+0.75V,流速1.0mL/min

冷冻切片机:恒温-20℃工况,切片厚度精度±1μm,适用脑组织冠状/矢状位连续切片

全波长酶标仪:具备震荡孵育功能,温度范围4-45℃,检测波长200-999nm,支持荧光/化学发光模式

激光共聚焦显微镜:405/488/561/638nm四激光通道,Z轴分辨率0.3μm,12位深度图像采集

超微量分光光度计:样品体积0.5μL,波长精度±1nm,蛋白浓度检测范围0.02-200mg/mL

电泳及转印系统:恒压/恒流/恒功率三模式,最大电压500V,转印效率>95%

体视学分析工作站:采用Stereo Investigator系统,可进行无偏神经元计数,切片抽样间距50μm

脑立体定位仪:三维移动精度10μm,适配小鼠适配器,支持Bregma/Lambda坐标系校准

离体器官灌注系统:恒流泵流速0.01-50mL/min,温度控制34-42℃,含氧合二氧化碳混合气体

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验,获取相关数据资料;

出具检测报告。

北检(北京)检测技术研究院
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