牛黄净脑片的成分及含量检测-检测标准-检测项目-北检院

检测样品的基本信息

本品为棕褐色片或糖衣片，糖衣片除去包衣后显棕褐色；气清凉，味苦。

检测范围

牛黄净脑片、牛黄散、牛黄丸、牛黄膏、牛黄清心丸、牛黄抱龙丸、人工培植牛黄、牛黄镇惊丸、安脑牛黄片、牛黄定志丸、牛黄净脑片、牛黄散、牛黄丸、牛黄膏、牛黄清心丸、牛黄抱龙丸、人工培植牛黄、牛黄镇惊丸、安脑牛黄片、牛黄定志丸、牛黄夺命散、牛黄青黛散、牛黄八宝丸、牛黄降压丸、牛黄蛇胆川贝液、牛黄至宝丸、万氏牛黄清心丸、牛黄清宫丸、牛黄解毒片、牛黄醒消丸、牛黄饮、牛黄丹、牛黄解毒丸、西黄丸、牛黄醒脑丸、复方牛黄消炎胶囊（牛黄消炎灵胶囊）、牛黄散子、三解牛黄散、小儿牛黄清肺片、牛黄上清丸、牛黄净脑片等。

参考检测方法

照高效液相色谱法（通则0512）测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液（40：25：35）为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备取大黄素对照品、大黄酚对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1ml含大黄素5μg、大黄酚10μg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品20片，糖衣片除去糖衣，精密称定，研细，取适量（约相当于2片的重量），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液15ml，加盐酸1ml，置水浴中水解40分钟，放冷，加10%氢氧化钠溶液2ml，摇匀，转移至25ml量瓶中，用甲醇分次洗涤容器，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每片含大黄以大黄素（C₁₅H₁₀O₅）与大黄酚（C₁₅H₁₀O₄）的总量计，不得少于0.25mg。

部分参考标准

《中国药典》2022年版

GB/T 41277-2022中药材(植物药)新品种评价技术规范

GB 6265-1986 中药材压缩打包运输包装件

GB/T 31773-2015 中药方剂编码规则及编码

样品鉴别方法

（1）取本品，置显微镜下观察：草酸钙簇晶大，直径60～140μm（大黄）。不规则片状结晶无色，有平直纹理（石膏）。不规则碎块金黄色或橙黄色，有光泽（雄黄）。不规则碎块大小不一，黑色（磁石）。（2）取本品2片，糖衣片除去包衣，研细，加乙醚10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取冰片对照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯（10:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。（3）取本品10片，糖衣片除去包衣，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸0.5ml，置水浴中加热水解30分钟，立即冷却，用乙醚振摇提取2次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取大黄素、大黄酚对照品，加甲醇制成每1ml各含lmg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色。（4）取本品5片，糖衣片除去包衣，研细，加甲醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约1ml，加在中性氧化铝柱（100～200目，2g，内径为lcm）上，用甲醇20ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄连对照药材50mg，同法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水（12：6：3：3：0.6）为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，在紫外光（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。（5）取本品15片，糖衣片除去包衣，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加稀盐酸调节pH值约至2，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，弃去乙醚液，再用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml合并三氯甲烷液（水溶液备用），蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取连翘苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸（14：2：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。（6）取〔鉴别〕（5）项下的备用水溶液，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液（水溶液备用），蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸（10：1：1.5）为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光（365nm）下检。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。（7）取〔鉴别〕（6）项下的备用水溶液，用氨试液调至中性，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，弃去乙酸乙酯液，再用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取葛根素对照品、栀子苷对照品，分别加甲醇制成每1ml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（14：5：0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光（365nm）下检视。供试品色谱中，在与葛根素对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与栀子苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。