六应丸的成分及含量检测-检测标准-检测项目-北检院

检测样品的基本信息

本品为黑色有光泽的水丸，除去包衣显深黄色；味苦、辛，有麻舌感。

检测范围

六应丸、一般痈、万应丸、妙应丸、神应丸、立应丸、感应丸、克应丸、乳香应丸、三八全应丸、六应丸、一般痈、万应丸、妙应丸、神应丸、立应丸、感应丸、克应丸、乳香应丸、三八全应丸、取积妙应丸、祛疟神应丸、神仙药应丸、禹应丸、香榔妙应丸、睡应丸、暖宫妙应丸、塌肿神应丸、金衣万应丸、保应丸、百应丸、大效妙应丸、大应丸、宫方感应丸、灵应丸、六胜七应丸、六应散、消结神应丸、止带妙应丸、玄应丸、六应丸等。

参考检测方法

蟾酥照高效液相色谱法（通则0512）测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.5%磷酸二氢钾溶液（50：50）（用磷酸调节pH值至3.2）为流动相；检测波长为296nm。理论板数按华蟾酥毒基峰计算应不低于9000。对照品溶液的制备取脂蟾毒配基对照品、华蟾酥毒基对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml分别含80μg和50μg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品适量，研细，取约0.3g，精密称定，精密加入甲醇20ml，称定重量，加热回流1.5小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每1g含蟾酥以脂蟾毒配基（C₂₄H₃₂O₄）和华蟾酥毒基（C₂₆H₃₁O₆）的总量计，不得少于6.5mg。胆红素照高效液相色谱法（通则0512）测定（避光操作）。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-1%冰醋酸溶液（95：5）为流动相；检测波长为450nm。理论板数按胆红素峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备取胆红素对照品适量，精密称定，加二氯甲烷制成每1ml含25μg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品适量，研成最细粉，取约20mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入10%草酸溶液（含0.15%十六烷基三甲基氯化铵）10ml，密塞，涡旋混匀，精密加入水饱和二氯甲烷25ml，密塞，称定重量，涡旋混匀，超声处理（功率500W，频率53kHz，水温25~35℃）30分钟，放冷，再称定重量，用水饱和二氯甲烷补足减失的重量，摇匀，离心（转速为每分钟4000转），分取二氯甲烷液，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每1g含牛黄以胆红素（C₃₃H_36N4O₆）计，不得少于26.2mg。

部分参考标准

《中国药典》2022年版

GB/T 41277-2022中药材(植物药)新品种评价技术规范

GB 6265-1986 中药材压缩打包运输包装件

GB/T 31773-2015 中药方剂编码规则及编码

样品鉴别方法

（1）取本品30丸，研碎，加三氯甲烷振摇提取3次，每次15ml，滤过，滤液浓缩至近干，加三氯甲烷0.5ml使溶解，作为供试品溶液，另取丁香酚对照品、冰片对照品，加三氯甲烷分别制成每1ml含1μL和1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述三种溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，在日光下检视。供试品色谱中，在与丁香酚对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与冰片对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。（2）取本品30丸，研碎，加三氯甲烷1ml，振摇，放置1小时，上清液作为供试品溶液。另取脂蟾毒配基对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各4μL，分別点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-三氯甲烷-丙酮（4：3：3）为展开剂，在用展开剂预平衡15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝绿色斑点。（3）取本品适量，研细，取0.07g，加甲醇25ml，加热回流，3小时，提取液蒸干，残渣加乙醇5ml超声处理使溶解，离心，取上清液作为供试品溶液。另取胆酸、去氧胆酸和猪去氧胆酸对照品适量，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液10μL、上述三种对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇-醋酸（20：25：3：2）的上层溶液为展开剂，展开二次，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与胆酸和去氧胆酸对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点及荧光斑点。