柑橘黑斑病菌快速检测

检测项目

病原菌分离培养、孢子形态学观察、ITS序列分析、β-tubulin基因扩增、致病性测定、菌落形态鉴定、产孢能力评估、温度敏感性测试、湿度适应性分析、寄主特异性验证、分子标记开发、实时荧光定量PCR验证、LAMP快速检测、免疫层析试纸条开发、显微成像分析、细胞壁成分检测、代谢产物分析、抗药性基因筛查、生物安全等级评定、环境适应性建模、侵染周期监测、潜伏期测定、病斑扩展速率计算、离体接种实验、活体接种验证、交叉感染试验、消毒剂有效性测试、紫外线耐受性评估、培养基优化筛选、菌株保藏稳定性监测

检测范围

柑橘叶片病斑组织、果实表皮病斑样本、枝条溃疡组织、果园土壤样本、灌溉水样、包装材料表面拭子、储藏库空气样本、苗木嫁接接口组织、种子表面附着物、花粉携带物分析、修剪工具残留物、运输车辆厢体拭子、冷藏库冷凝水样、有机肥发酵物料、昆虫媒介体表附着物、鸟类排泄物样本、砧木根系分泌物采集物、叶面喷施药剂残留物套袋果实表皮微生物群落分析套袋内壁凝结物采后处理药剂渗透度测试套袋材料孔隙度测定套袋内外温湿度梯度记录套袋微环境气体成分分析套袋降解产物筛查套袋重复使用污染评估套袋储存期微生物负载量监测套袋密封性测试套袋透光率测定套袋抗撕裂强度试验

检测方法

1.实时荧光定量PCR法：基于TaqMan探针技术特异性扩增G.citricarpa的CAL基因片段2.LAMP快速检测法：通过设计6条特异性引物实现60℃恒温条件下可视化快速诊断3.显微形态学鉴定：采用微分干涉显微镜观察分生孢子器形态及产孢结构特征4.免疫磁珠富集技术：利用单克隆抗体包被磁珠实现病原菌高效分离纯化5.基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOFMS）：建立病原菌蛋白质指纹图谱数据库6.双重微滴数字PCR：实现痕量病原DNA的绝对定量与假阴性排除7.纳米孔测序技术：通过MinION平台进行田间样本实时基因组测序8.红外光谱特征分析：建立病原菌胞壁多糖特征吸收峰识别模型9.流式细胞分选技术：结合荧光标记抗体实现病原孢子快速计数10.离体叶片接种法：标准化评估菌株致病力分级

检测标准

ISO16140-3:2021微生物学-方法验证-第3部分：参考方法在食品链微生物学中的验证协议GB/T36852-2018植物检疫中柑橘溃疡病菌检疫鉴定方法EPPOPM7/98(2)Guignardiacitricarpa诊断规程USDAAPHISPPQCitrusBlackSpotDetectionProtocolSN/T5397-2021进出境柑橘类水果黑斑病菌检疫鉴定规范AS5013.25-2017食品微生物学-第25部分：柑橘病原菌分子检测BSENISO16140-6:2019分子生物学方法验证的扩展方案NY/T2328-2013柑橘苗木病害检测技术规程JPP-NIAESMethodNo.178植物病原真菌分子鉴定指南AOSARP-2021种子健康检验中分子诊断技术应用规范

检测仪器

1.实时荧光定量PCR仪（ABIQuantStudio5）：用于病原DNA绝对定量分析2.全自动核酸提取系统（KingFisherFlex）：实现高通量样本标准化处理3.激光共聚焦显微镜（LeicaTCSSP8）：三维重构孢子器超微结构4.生物分子互作分析系统（BiacoreX100）：研究病原-宿主蛋白相互作用5.超高效液相色谱质谱联用仪（WatersXevoTQ-S）：分析次生代谢毒素组分6.全自动微生物鉴定系统（VITEKMS）：基于质谱技术的快速菌种鉴定7.便携式LAMP检测仪（GenieIII）：支持田间即时诊断的恒温扩增设备8.流式细胞分选仪（BDFACSAriaIII）：实现单孢子水平的高通量分选9.环境模拟培养箱（BINDERKBF720）：精确控制温湿度参数的侵染实验装置10.X射线显微CT系统（BrukerSkyScan1272）：无损观测果实内部侵染进程

检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。