GB/T 17819-1999 维生素预混料中维生素B12的测定 高效液相色谱法

标准中涉及的相关检测项目

标准《GB/T 17819-1999 维生素预混料中维生素B12的测定 高效液相色谱法》中主要涉及以下内容：

1. 检测项目：

该标准主要针对维生素预混料中的维生素B12含量进行测定，并确保其符合质量要求。

2. 检测方法：

采用高效液相色谱法（HPLC）分析维生素预混料中的维生素B12含量。具体包括以下流程：

• 样品的制备：

通过化学提取将维生素B12从样品中分离。

• 色谱分离：

使用高效液相色谱仪，在特定流动相和色谱条件下对维生素B12进行分离。

• 检测与定量：

通过紫外检测器测定维生素B12的吸收波长，根据仪器输出的峰面积进行含量定量。

3. 涉及产品：

本标准适用于以下几类产品：

• 维生素预混料：

用于动物营养和饲料添加剂领域。

• 与维生素B12相关的复合添加剂：

可能用于食品工业中各种补充剂的研究和生产。

GB/T 17819-1999 维生素预混料中维生素B12的测定 高效液相色谱法的基本信息

标准名：维生素预混料中维生素B12的测定 高效液相色谱法

标准号：GB/T 17819-1999

标准类别：国家标准(GB)

发布日期：1999-08-10

实施日期：2000-02-01

标准状态：现行

GB/T 17819-1999 维生素预混料中维生素B12的测定 高效液相色谱法的简介

本标准规定了用高效液相色谱法测定维生素预混料中维生素B12的方法。本标准适用于维生素预混料、维生素B12预混制剂中维生素B12的测定。检测范围为每千克样品中维生素B12含量大于0.25mg。GB/T17819-1999维生素预混料中维生素B12的测定高效液相色谱法GB/T17819-1999

GB/T 17819-1999 维生素预混料中维生素B12的测定 高效液相色谱法的部分内容

GB/T17819--1999

维生素预混料中维生素B1测定方法尚无国际标准。本标准参考《色谱科学杂志》第15卷和法国罗纳普朗克动物营养公司提出的分析方法，该法简捷、快速、准确，在技术内容上采用其中技术条件，在编写规格上，依据GB/T1.1--1993《标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第1部分：标准编写的基本规定》和GB/T1.4-1988《标准化工作导则化学分析方法标准编写规定》。本标准的附录A是标准的附录。

本标准由全国饲料工业标准化委员会提出并归口。本标准由国家饲料质量监督检验中心(北京)负责起草。本标准主要起草人：李兰、陈必芳、梁冬生。276

1范围

中华人民共和国国家标准

维生素预混料中维生素B12的测定高效液相色谱法

Determination of vitamin B2 in vitamins premix-High-pressure liquid chromatographyGB/T17819--1999

本标准规定了用高效液相色谱法测定维生素预混料中维生素B2的方法。本标准适用于维生素预混料、维生素B12预混制剂中维生素B12的测定。检测范围为每干克样品中维生素B2含量大于0.25mg。

2方法原理

试样中维生素B12用水提取，经高效液相色谱反相柱分离，其峰面积与维生素B2的含量成正比。3试剂和材料

本标准所用试剂除特殊注明外,均为优级纯，水为去离子水。3.1乙睛：色谱纯。

3.2正磷酸溶液。

3.325%乙醇溶液。

3.4维生素B12标推溶液。

3.4.1维生素B12标准贮备溶液：准确称取0.1000g维生素B12纯品（符合USP），溶解于100mL乙醇溶液（3.3)中，并稀释定容至刻度，摇匀。该标准贮备液每毫升含维生素B1z21mg。3.4.2维生素B2标准工作液：确吸取维生素B2标推贮备液（3.4.1)1mL于50mL容量瓶中，用移动相稀释定容刻度，摇匀。该标准工作液1mL含维生素Bi22μg。4仪器、设备

4.1实验室常用设备。

4.2超声波水浴。

4.3高效液相色谱仪，带自动进样器，紫外可调波长检测器。4.4超纯水装置。

4.5离心机：3000r/min。

5试样制备

取具有代表性样品至少500g，用四分法缩分至100g，粉碎，全部过0.28mm孔筛，混勺，装入样品瓶内密闭，避光低温保存备用。国家质量技术监督局1999-08-10批准2000-02-01实施

6分析步骤

6.1提取　

GB/T 17819--1999

6.1.1维生素预混料中维生素Bt2的提取称取试样2~～3g（精确至±0.0001g），置于100mL棕色容量瓶中，加约60mL去离子水，在超声波水浴中超声提取15min，取出，用去离子水定容至刻度，混匀，过滤，滤液过0.45μm滤膜，供高效液相色谱仪分析。

6.1.2维生素Bz制剂(1%～2%)的提取称取试样1g（精确至士0.0001g)于100mL棕色容量瓶中，加入约60mL去离子水，在超声波水浴中超声提取10min，取出用去离子水定容过滤。精确吸取1.00mL溶液于50mL棕色容量瓶中，用去离子水定容至刻度，该液通过0.45m滤膜过滤，供高效液相色谱仪分析。6.2测定步骤

6.2.1色谱条件

柱子:μ-Bondpak NHz,粒度 5 μm,3. 9 mmX 300 mm。柱温：30℃。

流动相：3%正磷酸水溶液260mL与700mL乙腈混合，超声脱气。流速:1.7 mL/min。

检测波长：361nm。

6.2.2定量测定

按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数，用两次以上相应标准工作液，对系统进行校正。将通过0.45um滤膜的样液（6.1.1)依次分装于自动进样小瓶中，依外标法上液相色谱仪测定。6.2.3也可采用反相离子对高效液相色谱测定维生素B12的方法（见附录A）7测定结果的计算

测定结果按式(1)计算：

Pxvxpxv..

P.×m×Vi

式中：-—-每干克样品中维生素B12的含量，mg，m-—试样质量，g；

V.--试样溶液进样体积，uL;

P试样溶液峰面积值；

V-一-试样稀释的体积，mL；

p:--标准溶液浓度，μg/mL，

V.标准溶液进样体积，μL，

户-—标准溶液峰面积平均值。

（１)

每个试样取两份试料进行平行测定，以其算术平均值为测定结果。结果表示到每千克样品中维生素Bi20.01 mg。

8允许差

同-分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差应不大于15%。278

A1原理

CB/T 17819-1999

附录A

（标准的附录）

反相离子对高效液相色谱

测定预混料中维生素B12

试样中维生素B2经水提取后，注入反相色谱柱上，由于输入了有机的反相离子对四丁基磷酸铵(PIC A)和已烷磺酸钠(PIC-B。)溶液，维生素B12的阳离子与移动相中阴离子形成离子偶化合物，在移动过程中与固定相分开达到分离。A2试剂和材料

A2.1甲醇（优级纯）。

A2.2磷酸。

A2.3四丁基磷酸铵（PIC A)。

A2.4已烷磺酸钠(PIC-B.）。

测定色谱条件

柱子：150mmX4.0mm(内径)不锈钢柱。固定相:μ-Bondpak Cis(ODS)粒度 5 μm。移动相：甲醇-水（250+750)约980mL，加入PICA、PICB（各一小瓶）20mL，用上述25%甲醇水定容至1L，混匀，用磷酸调节pH3。流速:1 mL/min。

柱温：室温。

检测器：紫外检测器，使用波长365nm。进样量：20μL。

保留时间：约7.0min。

A4其他各项与正文相同

北检院检验检测中心能够参考《GB/T 17819-1999 维生素预混料中维生素B12的测定 高效液相色谱法》中的检验检测项目，对规范内及相关产品的技术要求及各项指标进行分析测试。并出具检测报告。

检测范围包含《GB/T 17819-1999 维生素预混料中维生素B12的测定 高效液相色谱法》中适用范围中的所有样品。

测试项目

按照标准中给出的实验方法及实验方案、对需要检测的项目进行检验测试，检测项目包含《GB/T 17819-1999 维生素预混料中维生素B12的测定 高效液相色谱法》中规定的所有项目，以及出厂检验、型式检验等。

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检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。

北检研究院的服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。