GB/T 17818-1999 饲料中维生素D3的测定 高效液相色谱法

标准中涉及的相关检测项目

标准《GB/T 17818-1999 饲料中维生素D3的测定 高效液相色谱法》中涉及的内容

1. 检测项目

标准中主要提到的检测项目是饲料中的维生素D3含量。这一项目主要用于判断饲料中的维生素D3是否满足产品标签或者标准的限量要求。

2. 检测方法

标准采用了高效液相色谱法（HPLC）作为检测饲料中维生素D3含量的方法。

具体检测步骤包括：

• 饲料样品的提取与净化：样品需要经过有机溶剂提取，并进行必要的分离和净化。
• 色谱分离：利用高效液相色谱仪进行组分分离，选择合适的色谱柱和流动相。
• 检测与定量：通过检测器的响应值，结合标准曲线计算出样品中维生素D3的浓度。

3. 涉及产品

本标准主要适用于以下产品：

• 动物饲料（基础饲料、浓缩饲料、混合饲料等）。
• 饲料添加剂中含有的维生素D3。

这些产品可能包括家禽、家畜、水产养殖等动物的专用饲料。

总的来说，本标准对检测饲料中维生素D3的含量具有重要意义，可用于产品质量控制和合规性检测。

GB/T 17818-1999 饲料中维生素D3的测定 高效液相色谱法的基本信息

标准名：饲料中维生素D3的测定 高效液相色谱法

标准号：GB/T 17818-1999

标准类别：国家标准(GB)

发布日期：1999-08-01

实施日期：2000-02-01

标准状态：现行

GB/T 17818-1999 饲料中维生素D3的测定 高效液相色谱法的简介

本标准规定了饲料中维生素D3的测定——高效液相色谱法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、复合预混料和维生素预混料中维生素D3的测定。测量范围为每千克样品中含维生素D3(胆钙化醇)的量在500IU以上。GB/T17818-1999饲料中维生素D3的测定高效液相色谱法GB/T17818-1999

GB/T 17818-1999 饲料中维生素D3的测定 高效液相色谱法的部分内容

GB/T178181999

饲料中维生素D：的测定目前尚无国家标准和国际标准，本标准是参照美国公职分析化学家协会AOAC（1995年版）《混合饲料、预混合物和宠物食品中维生素D，液相色谱法》及瑞士罗氏药品化学有限公司维生素研究部发表的《饲料中维生素和类胡萝卜素现代分析方法》“用高效液相色谱法测定配合饲料和预混合饲料中维生素D，”而制定的。在技术内容上参照两法，在编写格式上依据GB/T1.1—1993《标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第1部分：标准编写的基本规定》和GB/T1.4-1988《标准化工作导则化学分析方法标准编写规定》。为了使饲料中维生素D：测定方法科学、准确、经济、实用，适合于我国不同实验室大量饲料样品的测定，在参照国外分析方法的基础上，增加了反相色谱测定条件。本标准由全国饲料工业标推化技术委员会提出并归口。本标准由国家饲料质量监督检验中心(北京)负责起草。本标准主要起草人：陈必芳、赵小阳。271

1范围

中华人民共和国国家标准

饲料中维生素D3的测定

高效液相色谱法

Determination of vitamin Dg in feeds High-pressure liquid chromatography本标准规定了饲料中维生素D的测定高效液相色谱法，GB/T 17818—1999

本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、复合预混料和维生素预混料中维生素D：的测定。测量范围为每千克样品中含维生素D，（胆钙化醇)的量在500IU以上。2引用标准

下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法3方法原理

用碱溶液皂化试验样品，乙醚提取未皂化的化合物，蒸发乙醚，残渣溶解于甲醇并将部分溶液注入高效液相色谱净化柱中除去干扰物，收集含维生素D：淋洗液馏分，蒸发至干，溶解于正已烷中，注入高效液相色谱分析柱，用紫外检测器在264nm处测定，通过外标法计算维生素D：的含量。当样品中维生素D：标示量超过每干克10000IU时，可省去高效液相色谱净化柱，试验溶液直接注入色谱分析柱分析。

4试剂和材料

除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水，色谱用水为去离子水，符合GB/T6682用水的规定。

4.1无水乙醚：无过氧化物。

4.1.1过氧化物检查方法：用5ml乙醚加1ml.10%碘化钾溶液，振摇1min，如有过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色。若加0.5%淀粉指示液，水层呈蓝色。该乙醚需处理后使用。4.1.2去除过氧化物的方法：乙醚用5%硫代硫酸钠溶液振摇，静置，分取乙醚层，再用蒸馏水振摇洗涤两次，重蒸，弃去首尾5%部分，收集馏出的乙醚，再检查过氧化物，应符合规定。4.2乙醇。

4.3正已烧：重蒸馏（或光谱纯）。4.41，4--氧六环。

4.5甲醇：优级纯。

国家质量技术监督局1999-08-10批准272

2000-02-01实施

4.62,6-.叔了基对甲酚（BHT)。4.7无水硫酸钠。

4.8氢氧化钾溶液500g/1.。

GB/T17818—1999

4.9抗坏血酸乙醇溶液5g/l.：取0.5g抗坏血酸结晶纯品溶解于4mL温热的蒸馏水中，用乙醇稀释至100mL.临用前配制。

4:10氯化钠溶液100g/L。

4.11维生素D.标准溶液

4.11.1维生素Ds标准贮备液：准确称取50.0mg维生素Ds（胆钙化醇）USP结晶纯品，于50mL棕色容量瓶中，用正已烷溶解并稀释至刻度，4℃保存。该贮备液的浓度为每毫升含1mg维生素D：。4.11.2维生素D：标准工作液：准确吸取维生素D：标准贮备液（4.11.1),用正已烷按1：100比例稀释，该标准溶液浓度为每毫升含10μg（400IU)维生素D3。4.12酚酸指示剂乙醇溶液10g/L。4.13氮气99.9%。

5仪器、设备

5.1实验室常用设备。

5.2圆底烧瓶，带回流冷凝器。

5.3恒温水浴或电热套。

5.4旋转蒸发器。

5.5超纯水器（或全磨口玻璃蒸馏器）。5.6高效液相色谱仪（两套），带紫外检测器。6试样的制备

选取有代表性的饲料样品至少500g，四分法缩减至100g，磨碎，全部通过0.28mm孔筛，混匀，装入密闭容器中，避光低温保存备用。7分析步骤

7.1试验溶液的制备

7.1.1皂化

称取试样，配合饲料10~20g，浓缩饲料10g，精确至0.001g。维生素预混料或复合预混料1~～5g精确至0.0001g。置入250ml.圆底烧瓶中，加50～60mL抗坏血酸乙醇溶液（4.9），使试样完全分散、浸湿.加10mL氢氧化钾溶液（4.8），混合均匀。置于沸水浴上回流30min，不时振荡防止试样粘附在瓶壁上，皂化结束，分别用5mL乙醇、5mL水自冷凝管顶端冲洗其内部，取出烧瓶冷却至约40C。7.1.2提取

定转移全部皂化液于盛有100ml.乙醚（4.1）的500mL分液漏斗中，用30～50mL蒸馏水分2~3次冲洗圆底烧瓶并入分液漏斗，加盖，放气，随后混合，激烈振荡2min，静置分层。转移水相于第二个分液漏斗中，分次用100，60mL乙醚重复提取两次，弃去水相，合并三次乙醚相。用氯化钠溶液（4.10)100mL洗涤一次，再用蒸馏水每次100mL洗涤乙醚提取液至中性，初次水洗时轻轻旋摇.防止乳化。乙醚提取液通过无水硫酸钠（4.7)脱水，转移到250mL.棕色容量瓶中，加100mgBHT（4.6)使之溶解，用乙醚定容至刻度（Vx）。以上操作均在避光通风柜内进行。7.1.3浓缩

从乙醚提取液（V.）中分取-定体积（V)（依据样品标示量、称样量和提取液量确定分取量）.置于旋转燕发器烧瓶中，在部分真空，水浴温度50C的条件下蒸发至干，或用氮气吹干。残渣用正已烷（4.3）273

GB/T 17818—1999

溶解（需净化时用甲醇溶解，按7.1.4进行），并稀释至10mL（V.）使其获得的溶液中每毫升含维生素D.2~~10μg（80~~400IU），离心或通过0.45μm过滤膜过滤，收集清液移入2mL小试管，用于高效液相色谱分析柱分析。

7.1.4使用高效液相色谱净化柱提取用5mL甲醇（4.5)溶解圆底烧瓶中的残渣，向高效液相色谱净化柱中注射0.5mL甲醇溶液（按7.2.1所述色谱条件，以维生素D标准甲醇溶液流出时间）收集含维生素D：的馏分于50ml.小容量瓶中，蒸发至干(或用氮气吹干），溶解于正己烷中。所测样品的维生素D，标示量在每千克超过100001U范圈时，可以不使用高效液相色谱净化柱，直接用分析柱分析。

7.2测定

7.2.1高效液相色谱净化条件

柱和固定相:Lichrosorb RP-8,粒度 10 μm,25 cm×10 mm(内径)。移动相：甲醇+水（90+10）。

流速:2.0mL/min。

温度：室温。

检测器：紫外检测器，使用波长264nm。7.2.2高效液相色谱分析条件

7.2.2.1正相色谱

柱长：25cm、内径4mm不锈钢柱。固定相：硅胶Lichrosorb si60,粒度5μm。移动想：正已烷十1，4-二氧六环（93十7)，恒量流动。流速:l mL/min。

温度：室温。

进样体积：20μl。

检测器：紫外检测器，使用波长264nm。保留时间：14.88min。

7.2.2.2反相色谱

柱长：12.5cm，内径4mm不锈钢柱。固定相：ODS（或C18），粒度5um。移动相：甲醇十水（95十5），恒量流动。流速:1 mL/min。

温度：室温，

进样体积：20μL。

检测器：紫外检测器，使用波长264nm。保留时间：6.88min。

7.2.3定测定

按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数和灵敏度（AUFS），为准确测量按要求对分析柱进行系统适应性试验，使维生素D.与维生素D,原或其他蜂之间有较好分离度，其R≥1.0。向色谱柱注入相应的维生素D：标准工作液（4.11.2V）和试验溶液（7.1.3V），得到色谱峰面积的响应值（Px、P），用外标法定量测定。

8结果的计算与表述

8.1计算公式：结果按式(1)计算：274

GB/T17818—1999

P X Vex X Ve. X p X Vs. X 1. 25P.XmxV.XVXf.

式中：ov-每克或每千克样品中含维生素D.的量，IU；-一样品质量，g，

Ve-一提取液的总体积，mL；

-从乙醚提取液（Ve)中分取的溶液体积，mL；Vi

试验溶液最终体积，mL；

一标准溶液浓度，ug/mL；

Vat—维生素D3标准溶液进样体积，μL；从试验溶液中分取的进样体积，uL；V

与标准溶液进样体积(V)相应的峰面积响应值；与从试验溶液中分取的进样体积(V.)相应的峰面积响应值；转换系数，1国际单位（IU)维生素D：相当于0.025μg胆钙化醇；·（1)）

为回流皂化时生成维生素D原的校正因子。1.25

注：标准维生素D结晶纯品与试样同样皂化处理后，所得标准溶液注入高效液相色谱分析柱以维生素D，峰面积计算时可不乘1.25。

8.2平行测定结果用算术平均值表示，保留有效数3位。9允许差

同-一分析者对同试样同时两次测定(或重复测定)所得结果相对偏差：允许相对偏差，%

每干克试样中含维生素D：的量，IU1. 00×103~~1. 00 X105

>1. 00×105～1.00×106

>1.00×106

北检院检验检测中心能够参考《GB/T 17818-1999 饲料中维生素D3的测定 高效液相色谱法》中的检验检测项目，对规范内及相关产品的技术要求及各项指标进行分析测试。并出具检测报告。

检测范围包含《GB/T 17818-1999 饲料中维生素D3的测定 高效液相色谱法》中适用范围中的所有样品。

测试项目

按照标准中给出的实验方法及实验方案、对需要检测的项目进行检验测试，检测项目包含《GB/T 17818-1999 饲料中维生素D3的测定 高效液相色谱法》中规定的所有项目，以及出厂检验、型式检验等。

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检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。

北检研究院的服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。