GB/T 17816-1999 饲料中总抗坏血酸的测定邻苯二胺荧光法-检测标准-检测项目-北检院

标准中涉及的相关检测项目

以下是根据标准《GB/T 17816-1999 饲料中总抗坏血酸的测定邻苯二胺荧光法》提及的相关内容：

检测项目：

总抗坏血酸（维生素C的主要形式）含量的测定。

检测方法：

邻苯二胺荧光法：这种方法利用抗坏血酸在酸性条件下与邻苯二胺反应生成荧光化合物，通过荧光检测仪对生成物的荧光强度进行测量，从而计算出饲料中总抗坏血酸的含量。
该方法的基本步骤包括样品提取、化学反应、荧光检测和数据处理。

涉及产品：

动物饲料及饲料添加剂。
各类用于畜牧业和养殖业的商业饲料，如猪、牛、羊、鸡、鱼等动物饲料。
饲料混合料及预混料产品。

GB/T 17816-1999 饲料中总抗坏血酸的测定邻苯二胺荧光法的基本信息

标准名：饲料中总抗坏血酸的测定邻苯二胺荧光法

标准号：GB/T 17816-1999

标准类别：国家标准(GB)

发布日期：1999-08-01

实施日期：2000-02-01

标准状态：现行

GB/T 17816-1999 饲料中总抗坏血酸的测定邻苯二胺荧光法的简介

本标准规定了用邻苯二胺荧光法测定饲料中总抗坏血酸的方法。本标准适用于单一饲料、配合饲料、预混料及浓缩饲料。不适用以酯化抗坏血酸形式添加的各种饲料中抗坏血酸的测定。在最终提取液中抗坏血酸最小检出限为0.022μg/mL。GB/T17816-1999饲料中总抗坏血酸的测定邻苯二胺荧光法GB/T17816-1999

GB/T 17816-1999 饲料中总抗坏血酸的测定邻苯二胺荧光法的部分内容

GB/T17816-1999

本标准参考了美国公职分析化学家协会A0AC(1995年版)45.1.14～45.1.16《维生素制品和果汁中的维生素C》、《维生紊制品中的维生素C》和《食品中的总维生素C》的规定，在技术内容上，综合上述三种方法，在操作步骤上作了相应的变更，以便于实际操作。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。本标准由国家饲料质量监督检验中心(武汉)负责起草。本标准主要起草人：屈利文、钱肪。262

1范围

中华人民共和国国家标准

饲料中总抗坏血酸的测定

邻苯二胺荧光法

Determination of total ascorbic acid in feedso-Phenylenediamine fluorometry本标准规定了用邻苯二胺荧光法测定饲料中总抗坏血酸的方法。GB/T17816—1999

本标准适用于单一饲料、配合饲料、预混料及浓缩饲料。不适用以酯化抗坏血酸形式添加的各种饲料中抗坏血酸的测定。

在最终提取液中抗坏血酸最小检出限为0.022μg/mL。2引用标准

下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T6682--1992分析实验室用水规格和试验方法3方法原理

先将试样中抗坏血酸在弱酸性条件下提取出来，提取液中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，与邻苯二胺（OPDA)反应生成有荧光的喹喔啉(quinoxaline），其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比。另外，根据脱氢抗坏血酸与硼酸可形成硼酸-脱氢抗坏血酸络合物而不与邻苯二胺反应，以此作为“空白”排除试样中荧光杂质的干扰。4试剂

本标准所用试剂，除特殊说明外,均为分析纯。实验室用水应符合GB/T6682中三级水的规格。4.1偏磷酸-乙酸溶液：称取15g偏磷酸，加入40mL冰乙酸及250mL水，加温，搅拌，使之逐渐溶解，冷却后加水至500mL。于4℃冰箱可保存7～10天。4.20.15mol/L硫酸溶液：取10mL硫酸，小心加入水中，再加水稀释至1200mL。4.3偏磷酸-乙酸-硫酸溶液：以0.15mol/L硫酸溶液（4.2)为稀释液代替水，其余同4.1配制。4.450%乙酸钠溶液：称取500g乙酸钠（CH，C00Na·3H,0)，加水至1000mL。4.5硼酸-乙酸钠溶液：称取3g硼酸，溶于100mL乙酸钠溶液（4.4)中。临用前配制。4.6邻苯二胺溶液：称取20mg邻苯二胺，于临用前用水稀释至100ml.。4.7抗坏血酸标准溶液（1 mg/mL）：准确称取50mg抗坏血酸，用溶液（4.1)溶于50mL容量瓶中，并稀释至刻度。临用前配制。

4.8抗坏血酸标准工作溶液（100μg/mL）：取10mL抗坏血酸标准溶液（4.7），用溶液（4.1)稀释至国家质量技术监督局1999-08-10批准2000-02-01实施

GB/T 17816—1999

100ml。稀释前测试pH值，如其pH大于2.2时，则应用溶液（4.3)稀释。4.90.04%百里酚蓝指示剂溶液：称取0.1g百里酚蓝，加0.02mol/L氢氧化钠溶液，在玻璃研钵中研磨至溶解，氢氧化钠的用量为10.75mL，磨溶后用水稀释至250mL。变色范围：pH值等于1.2为红色；pH值等于2.8为黄色；pH值大于4.0为蓝色。4.10活性炭的活化：加200g炭粉于1L盐酸（1+9）中，加热回流1～2h，过滤，用水洗至无铁离子（Fe3）为止，置于110～120℃烘箱中干燥，备用。检验铁离子方法：利用普鲁士蓝反应。将2%亚铁氰化钾与1%盐酸等量混合，将上述洗出滤液滴入，如有铁离子则产生蓝色沉淀。5仪器、设备

5.1荧光分光光度计：激发波长350nm，发射波长430nm，1cm石英比色皿。5.2实验室用样品粉碎机。

5.3实验室常用仪器、设备。

6试样制备

取具有代表性样品，用四分法缩分至200g，然后粉碎至过0.45mm（40目）筛，混匀后装于密封容器，保存备用。

7测定步骤

7.1试样中碱性物质量的预检

称取试样1g于烧杯中，加10mL偏磷酸-乙酸溶液（4.1），用百里酚蓝指示剂检查pH值.如呈红色，即可用偏磷酸-乙酸溶液作样品提取稀释液。若呈黄色或蓝色，则滴加偏磷酸-乙酸-硫酸溶液（4.3），使其变红，并记录所用量。

7.2试样溶液的制备

称取试样若干克（精确至0.0001g，含抗坏血酸约2.5~~10mg）于100mL容量瓶中，按7.1预检碱量，加偏磷酸-乙酸-硫酸溶液（4.3)调至pH为1.2，或者直接用偏磷酸-乙酸溶液（4.1）定容，摇匀。如样品含大量悬浮物，则需进行过滤，滤液为试样溶液。7.3测定步骤

7.3.1氧化处理：分别取上述试样溶液（7.2)及标准工作溶液（4.8)100mL于200mL带盖三角瓶中，加2g活性炭（4.10），用力振摇1min，干法过滤，弃去最初数毫升，收集其余全部滤液，即为样品氧化液和标准氧化液。

7.3.2各取10mL标准氧化液于两个100mL容量瓶中分别标明标准”及“标准空白”。7.3.3各取10ml.样品氧化液于两个100mL容量瓶中分别标明“样品”及“样品空白”。7.3.4于标准空白”及\样品空白”溶液中各加5mL硼酸-乙酸钠溶液（4.5），混合摇动15min，用水稀释至 100 mL。

7.3.5“F\标准”及“样品”溶液中各加5mL乙酸钠溶液（4.4），用水稀释至100mL。7.3.6荧光反应：取7.3.4中“标准空白”“样品空白”溶液及7.3.5中“样品”溶液2.0mL，分别置于10mI.带盖试管中。在暗室迅速向各管中加入5mL邻苯二胺溶液（4.6），振摇混合，在室温下反应35min，于激发波长350nm，发射波长430nm处测定荧光强度。7.3.7标准曲线的绘制：取上述\标准”溶液（7.3.5)（抗坏血酸含量10μg/mL)0.5,1.0，1.5和2.0mL标准系列，各双份分别置于10mL带盖试管中，再用水补充至2.0mL。荧光反应按7.3.6。以标准系列荧光强度分别减去标准空白荧光强度为纵坐标，对应抗坏血酸含量（ug)为横坐标，绘制标准曲线。261

8分析结果的计算及表示

分析结果按式(1)计算：

GB/T17816-1999

式中：X---每干克试样中含抗坏血酸及脱氢抗坏血酸总量，mg；C从标准曲线上查得的试样液中抗坏血酸的含量，ug;m·试样质量..;

n—试样溶液的稀释倍数。

所得结果表示到小数点后一位。9允许差

每个试样称取两份试料进行平行测定，以其算术平均值为测定结果。...(1)

在干克饲料中抗坏血酸的含量小于或等于1000mg时，测定结果的相对偏差不大于10%。在每干克饲料中抗坏血酸的含量大于1000mg时，测定结果的相对偏差不大于5%。265

现行

北检院检验检测中心能够参考《GB/T 17816-1999 饲料中总抗坏血酸的测定邻苯二胺荧光法》中的检验检测项目，对规范内及相关产品的技术要求及各项指标进行分析测试。并出具检测报告。

检测范围包含《GB/T 17816-1999 饲料中总抗坏血酸的测定邻苯二胺荧光法》中适用范围中的所有样品。