GB/T 17817-1999 饲料中维生素A的测定高效液相色谱法-检测标准-检测项目-北检院

标准中涉及的相关检测项目

标准《GB/T 17817-1999 饲料中维生素A的测定高效液相色谱法》中，具体提到了以下相关内容：

一、检测项目：

饲料中维生素A的含量。

二、检测方法：

采用高效液相色谱法（HPLC）。
通过使用紫外检测器（UV检测器）对维生素A进行定量分析。
样品处理方式：饲料样品需要经过提取、净化及稀释处理后，进行检测。
操作步骤包括：称取一定量的样品、添加适当的溶剂进行提取、滤过后进样分析。

三、涉及产品：

畜禽饲料（如鸡饲料、猪饲料、牛饲料等）。
水产饲料（如鱼饲料、虾饲料）。
宠物饲料。
其它商业化复合饲料中需要检测维生素A含量的产品。

本标准规范了饲料中维生素A含量的检测原理、试剂要求、仪器设备、操作步骤以及结果的计算方法，为确保饲料产品的质量及营养成分提供了科学依据。

GB/T 17817-1999 饲料中维生素A的测定高效液相色谱法的基本信息

标准名：饲料中维生素A的测定高效液相色谱法

标准号：GB/T 17817-1999

标准类别：国家标准(GB)

发布日期：1999-08-10

实施日期：2000-02-01

标准状态：现行

GB/T 17817-1999 饲料中维生素A的测定高效液相色谱法的简介

本标准规定了饲料中维生素A的测定——高效液相色谱法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、复合预混料和维生素预混料中维生素A的测定。测量范围为每千克样品中含维生素A在1000IU以上。GB/T17817-1999饲料中维生素A的测定高效液相色谱法GB/T17817-1999

GB/T 17817-1999 饲料中维生素A的测定高效液相色谱法的部分内容

GB/T17817—1999

饲料中维生素A的测定目前尚无国际标准，本标准是在参照瑞士罗氏药品化学有限公司维生素研究部发表的《饲料中维生素和类胡萝卜素现代分析方法》“用高效液相色谱法测定配合饲料、预混合饲料和浓缩维生素中维生素A”而制定的。在技术内容上参照该法，在编写格式上依据GB/T1.1-1993《标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第1部分：标准编写的基本规定》和GB/T1.4--1988《标准化工作导则化学分析方法标准编写规定》。为了使饲料中维生素A测定方法科学、准确、经济、实用，适合于我国不同实验室大量饲料样品的测定，在参照国外分析方法的基础上增加了反相色谱测定条件。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。本标准由国家饲料质量监督检验中心（北京)负责起草。本标准主要起草人：陈必芳、赵小阳、李俊玲。1范围

中华人民共和国国家标准

饲料中维生素A的测定

高效液相色谱法

Determination of vitamin A in feeds--High-pressure liquid chromatography本标准规定了饲料中维生素A的测定—一高效液相色谱法。GB/T 17817--1999

本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、复合预混料和维生素预混料中维生素A的测定。测量范围为每千克样品中含维生素A在1000IU以上。2引用标准

下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法3方法原理

用碱溶液皂化试验样品，乙醚提取未皂化的化合物，蒸发乙醚并将残渣溶解于正已烷中，将正已烷提取物注入用硅胶填充的高效液相色谱柱，用紫外检测器测定，外标法计算维生素A含量。4试剂和材料

除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水，色谱用水为去离子水，符合GB/T6682中用水规定。

4.1无水乙醚（无过氧化物）。

4.1.1过氧化物检查方法：用5mL乙醚加1mL10%碘化钾溶液，振摇1min，如有过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色。若加0.5%淀粉指示液，水层呈蓝色。该乙醚需处理后使用。4.1.2去除过氧化物的方法：乙醚用5%硫代硫酸钠溶液振摇，静置，分取乙醚层，再用蒸馏水振摇洗涤两次，重蒸，弃去首尾5%部分，收集馏出的乙醚，再检查过氧化物，应符合规定。4.2乙醇。

4.3正已烷：重蒸馏（或光谱纯）。4.4异丙醇：重蒸馏。

4.5甲醇：优级纯。

4.62.6-二叔丁基对甲酚（BHT）。4.7无水硫酸钠。

4.8氢氧化钾溶液500g/l.。

国家质量技术监督局1999-08~10批准2000-02-01实施

GB/T 17817---1999

4.9抗坏血酸乙醇溶液5g/L:取0.5g抗坏血酸结晶纯品溶解于4mL温热的蒸馏水中，用乙醇稀释至100ml.，临用前配制。

4.10维生素A标准溶液

4.10.1维生素A标准备液：准确称取维生素A乙酸酯油剂（每克含1.00×10°1U)0.1000g或结晶纯品0.0344g（符合中国药典）于皂化瓶中，按分析步骤（7.1)皂化和提取，将乙醚提取液全部浓缩蒸发至干，用正已烷溶解残渣置入100mL棕色容量瓶中并稀释至刻度，混匀，4C保存。该贮备液浓度为每毫升含10001U维生素A。

4.10.2维生素A标准工作液：准确吸取1.00mL维生素A标准贮备液（4.10.1），用正已烷（4.3）稀释100倍；若用反相色谱测定，将1.00mL维生素A标准贮备液置入10mI.棕色小容量瓶中，用氮气吹干，用甲醇（4.5)溶解并稀释至刻度，混匀，再按1：10比例稀释。该标准工作液浓度为每毫升含10IU维生素A。

4.11酚酸指示剂乙醇溶液10g/L。4.12氮气99.9% 。

5仪器、设备

5.1实验室常用仪器、设备。

5.2圆底烧瓶，带回流冷凝器。

5.3恒温水浴或电热套。

5.4旋转蒸发器。

5.5超纯水器（或全磨口玻璃蒸馏器）。5.6．高效液相色谱仪，带紫外检测器。6试样的制备

选取有代表性的饲料样品至少500g，四分法缩减至100g，磨碎，全部通过0.28mm孔筛，混匀，装入密闭容器中，避光低温保存备用。7分析步骤

7.1试验溶液的制备

7.1.1皂化

称取配合饲料或浓缩饲料10g，精确至0.001g。维生素预混料或复合预混料15g.精确至0.0001g。置入250mL圆底烧瓶中，加50mL抗坏血酸乙醇溶液（4.9），使试样完全分散、漫湿，加10mL氢氧化钾溶液（4.8），混匀。置于沸水浴上回流30min，不时振荡防止试样粘附在瓶壁上，皂化结束，分别用5mL乙醇、5mL水自冷凝管顶端冲洗其内部，取出烧瓶冷却至约40℃。7.1.2提取

定量转移全部皂化液于盛有100mL乙醚（4.1）的500mL分液漏斗中，用30~50ml.蒸馏水分23次冲洗圆底烧瓶并入分液漏斗，加盖、放气、随后混合，激烈振荡2min，静置分层。转移水相于第二个分液漏斗中，分次用100、60mL乙醚重复提取两次，弃去水相，合并三次乙醚相。用蒸馏水每次100mI.洗涤乙醚提取液至中性，初次水洗时轻轻旋摇，防止乳化。乙醚提取液通过无水硫酸钠（4.7）脱水，转移到250ml棕色容量瓶中，加100mgBHT（4.6）使之溶解，用乙醚定容至刻度（Vex）。以上操作均在避光通风柜内进行。

7.1.3浓缩

从乙醚提取液（Vx）中分取一定体积(V,）（依据样品标示量，称样量和提取液量确定分取量），置于旋转蒸发器烧瓶中，在水浴温度约50℃，部分真空条件下蒸发至干或用氮气吹干，残渣用正已烷溶解268

GB/T 17817-1999

（反相色谱用甲醇溶解），并稀释至10mL（Vn），使其维生素A最后浓度为每毫升5～10IU，离心或通过0.45μm过滤膜过滤，收集清液移入2mL小试管中，用于高效液相色谱仪分析。7.2测定

7.2.1高效液相色谱条件

7.2.1.1正相色谱

柱长：12.5cm，内径4mm不锈钢柱。固定相：硅胶Lichrosorbsi60，粒度5μm。移动相：正已烷十异丙醇（98十2），恒量流动。流速:1 mL/min。

温度室温。

进样体积：20μL。

检测器：紫外检测器，使用波长326nm。保留时间：3.75min

7.2.1.2反相色谱

柱长：12.5cm，内径4mm不锈钢柱。固定相：ODS（或C18），粒度5μm。移动相：甲醇+水（95+5）。

流速:l mL/min。

温度：室温。

进样体积：20μl。

检测器：紫外检测器，使用波长326nm。保留时间：4.57min。

7.2.2定量测定

按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数和灵敏度（AUFS），色谱峰分离度符合要求（R≥1.5）（中国药典1995附录）。向色谱柱注入相应的维生素A标准工作液（4.10.2V）和试验溶液（7.1.3V.）得到色谱峰面积的响应值(P、P)，用外标法定量测定。8 结果的计算与表述

8.1计算公式：结果按式（1)计算：A

式中： A-

P, X Vex X Ven X p; X Vs

PtxmxV.xVxf.

每克或每千克样品中含维生素A的量，IU；m—样品质量·g；

提取液的总体积，mL，

—一从提取液(Vx)中分取的溶液体积，mL；V.

V..—-试验溶液最终体积，mL

标准溶液浓度，μg/mL；

维生素A标准溶液进样体积，uL；--从试验溶液中分取的进样体积，μL；Ps—-与标准工作液进样体积(Vt)相应的峰面积响应值；P,-—与从试验溶液中分取的进样体积(V)相应的峰面积响应值；f.-—转换系数，1国际单位相当于0.344ug维生素A乙酸酯，或0.300ug视黄醇活性。8.2平行测定结果用算术平均值表示，保留有效数3位。(

允许差

GB/T 17817—1999

同一分析者对同一试样同时两次测定（或重复测定）所得结果相对偏差：每千克试样中含维生素A的量，IU1. 00×103~1. 00 ×104

>1.00×10*~1.00×105

>1. 00 ×105~1. 00 ×106

>1.00×106

相对偏差，%

现行

北检院检验检测中心能够参考《GB/T 17817-1999 饲料中维生素A的测定高效液相色谱法》中的检验检测项目，对规范内及相关产品的技术要求及各项指标进行分析测试。并出具检测报告。

检测范围包含《GB/T 17817-1999 饲料中维生素A的测定高效液相色谱法》中适用范围中的所有样品。