GB/T 5413.14-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 维生素B12的测定

标准中涉及的相关检测项目

1. 检测项目：

• 维生素B12含量

该标准主要关注婴幼儿配方食品和乳粉中维生素B12的含量检测，以确保产品营养成分符合标准要求。

2. 检测方法：

• 采用微生物法对婴幼儿配方食品和乳粉中维生素B12进行定量检测。

其中，微生物法的原理是利用特定的指示微生物（如乳杆菌）对维生素B12的特异性需求，通过样品中的维生素B12作为生长因子促进微生物生长，最终通过测定发酵液的浑浊度或酸度变化，定量计算样品中的维生素B12含量。

3. 涉及的产品：

• 婴幼儿配方奶粉
• 婴幼儿营养补充食品
• 其他乳粉类产品

以上产品均需按照该标准进行检测，以保证产品质量和营养成分达标。

总结来说，《GB/T 5413.14-1997》主要集中于检测婴幼儿配方食品和乳粉中的维生素B12含量，采用微生物法进行定量检测，并适用于婴幼儿配方奶粉及相关乳制品。

GB/T 5413.14-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 维生素B12的测定的基本信息

标准名：婴幼儿配方食品和乳粉 维生素B12的测定

标准号：GB/T 5413.14-1997

标准类别：国家标准(GB)

发布日期：1997-05-28

实施日期：1998-09-01

标准状态：现行

GB/T 5413.14-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 维生素B12的测定的简介

本标准规定了用微生物法测定维生素B12的方法。本标准适用于婴幼儿配方食品和乳粉中维生素B12的测定。GB/T5413.14-1997婴幼儿配方食品和乳粉维生素B12的测定GB/T5413.14-1997

GB/T 5413.14-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 维生素B12的测定的部分内容

GB/T5413.14—1997

本标准等效采用美国公职分析化学师协会（AOAC)方法，方法准确、灵敏度高。本系列标准从实施之日起，代替GB5413一85。本标准由中国轻工总会提出。

本标准由全国乳品标准化中心归口。本标准负责起草单位：国家乳制品质量监督检验中心。本标准参加起草单位：卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀巢(中国)投资服务有限公司。本标主要起草人：张玉杰、王芸、殿晓红、吕为群。277

中华人民共和国国家标准

婴幼儿配方食品和乳粉

维生素B12的测定

Milk powder and formula foods for infant and young chidrenDetermination of vitamin Br2 content1范围

本标准规定了用微生物法测定维生素B12的方法。本标准适用于婴幼儿配方食品和乳粉中维生素B12的测定。2方法原理

GB/T 5413.14—1997

代替GB5413--85

莱士曼氏乳酸杆菌(Lactobacillus leichmanni)对维生素 Biz的存在具有极高灵敏性。利用这种特异性可定量测出样品中维生素B12的含量。3试剂、菌种和培养基

所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。3.1生理盐水：9g/L。

3.2乙醇：体积分数为25%。

3.3无水磷酸氢二钠。

3.4无水偏重亚硫酸钠。

3.5柠檬酸(含一个结晶水)。

3.6菌种：莱土曼氏乳酸杆菌（Lactobacillus leichmannii）。3.7培养基。

3.7.1乳酸杆菌琼脂培养基：光解陈15g，酵母浸膏5g，葡萄糖10g，番茄汁100mL，磷酸二氢钾2g，聚山梨糖单油酸酯1g，琼脂10g，蒸馏水1000mL，pH6.8士0.2（25℃）。3.7.2乳酸杆菌肉汤培养基：光解陈15g，酵母浸膏5g，葡萄糖10g，番茄汁100mL，磷酸二氢钾2g，聚山梨糖单油酸酯1g，蒸馏水1000mL，pH6.8士0.2（25℃）。3.7.3维生素B12测定用培养基：无维生素酸水解酪蛋白15g，葡萄糖40g，天门冬酰胺0.2g，柠檬酸钠20g，抗坏血酸4g，L-胱氨酸0.4g，DL-色氨酸0.4g，硫酸腺嘌呤20mg，盐酸鸟嘌呤20mg，尿嘧啶20mg，黄嘌呤20mg，核黄素1mg，盐酸硫胺素1mg，生物素10μg，烟酸2mg，p-氨基苯甲酸2mg，泛酸钙1mg，盐酸吡哆醇4mg，盐酸吡哆醛4mg，盐酸吡哆胺800μg，叶酸200μg，磷酸二氢钾1g，磷酸氢二钾1g，硫酸镁0.4mg，氟化钠20mg，硫酸亚铁20mg，硫酸锰20mg，聚山梨糖单油酸酯2g，蒸馅水1000mL，pH6.0±0. 2(25℃)。

3.8维生素B12:标准品。

国家技术监督局1997-05-28批准278

1998-09-01实施

4仪器

常用实验室仪器及：

分光光度计。

5制备

5.1菌种的制备

GB/T5413.141997

5.1.1将保存在直柱状乳酸杆菌琼脂培养基中的莱士曼氏乳酸杆菌接种到新的培养基中。培养后再转接一次，然后再将其从固体培养基上转接到乳酸杆菌肉汤培养基中培养。5.1.2将乳酸杆菌肉汤中的培养液以2000r/min离心2～3min，倾出上清液，加入10mL生理盐水（3.1），搅匀，再离心2～3min，如此清洗3~4次，吸0.4mL该菌悬液于10mL盐水（3.1)中，待测。5.1.3用分光光度计，以生理盐水（3.1)做空白，于550nm波长下测5.1.2中菌悬液的透光率，此时应在60%～80%之间。

5.2标准溶液的制备

5.2.1维生素B12标准贮备液，浓度为100ng/mL。精确称取维生素B1z标准品，用乙醇(3.2)定容到维生素 B12浓度为 100ng /mL。5.2.2维生素B12中间贮备液，浓度为1ng/mL用乙醇（3.2)将10mL标准贮备液（5.2.1)定容至1000ml。5.2.3标准工作液，分二个浓度：高浓度——维生素B12的浓度为0.02ng /mL，低浓度-—维生素 B12的浓度为0.01ng/mL。从中间液中（5.2.2）吸二个5mL，用蒸馏水分别定容到250mL和500mL。6操作步骤

6.1样品的处理

6.1.1无水磷酸氢二钠（3.3)1.3g，无水偏重亚硫酸钠（3.4)1.0g，柠檬酸（含一个结晶水）(3.5)1.2g，用100mL蒸馏水溶解。

6.7.2称一定量的样品（约含维生素B1250~100ng），用10mL的上述溶液（6.1.1）混合后，再加150mL蒸馏水，于121℃水解10min，冷却后调pH至4.5，再用蒸馏水稀释，使最终溶液中维生素B12的质量浓度约在0.01~0.02ng/mL，偏重亚硫酸钠的质量浓度小于0.03mg/mL。6.2标雄曲线的制备

按表1顺序加人蒸馏水、标准溶液和维生素B12测定用培养基于培养管中，一式三份。表1

试管号No.

蒸馏水，mL

标准溶液”，mL

培养基,mL

1）试管 No.3～7中加低浓度标准溶液;No.8~10 中加高浓度标准溶液，6.3测定液

按表2顺序如蒸馏水、样品溶液和维生素B12测定用培养基于培养管内，-式三份。&

6.4接种

试管号No.

蒸馏水,mL

样品,mL

培养基，mL

GB/T 5413. 14-1997

将6.2和6.3中所有的试管于121℃灭菌5min，然后迅速冷却。将6.1.2中的菌悬液用毛细滴管向上述试管中各加1滴（其中标准曲线管中No.1除外）,混匀，37℃士0.5℃培养19~20h。6.5测定

以接种空白管做对照，测最高浓度标准样管的T，二个小时后重新读数，二次结果T值≤2%，则取出全部检验管测其T，并记录。

7分析结巢的表述

以标样含维生素B12的量为横坐标，T值为纵坐标做工作曲线。根据样品测得的T值，从标准曲线中查得维生素B12含量的平均值，再根据式（1)计算每百克（或毫升）样品中的实际含量：样品中维生素Br2Lμg/100g(mL))=m

式中：—从曲线中查得样品中维生素B12的平均含量，ng，F—稀释因子，

样品的质量(或体积），g（或mL)。m-

8允许差

同一样品的两次测定值之差不得超过两次测定平均值的10%。280

北检院检验检测中心能够参考《GB/T 5413.14-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 维生素B12的测定》中的检验检测项目，对规范内及相关产品的技术要求及各项指标进行分析测试。并出具检测报告。

检测范围包含《GB/T 5413.14-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 维生素B12的测定》中适用范围中的所有样品。

测试项目

按照标准中给出的实验方法及实验方案、对需要检测的项目进行检验测试，检测项目包含《GB/T 5413.14-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 维生素B12的测定》中规定的所有项目，以及出厂检验、型式检验等。

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检测流程

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出具检测报告。

北检研究院的服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。