GB/T 5413.11-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 维生素B1的测定

标准中涉及的相关检测项目

检测项目：

• 维生素B1（硫胺素）的含量。

检测方法：

• 该标准主要采用荧光测定法作为检测维生素B1含量的分析方法。该方法通过在适当条件下使维生素B1生成具荧光的化合物，利用荧光分光光度计进行测定。

涉及产品：

• 婴幼儿配方食品
• 乳粉，包括全脂奶粉、脱脂奶粉等。

这些产品由于其目标消费群体的特殊性，需要符合特定的营养标准，而维生素B1作为人体必需的维生素之一，其含量的准确测定对于产品的营养均衡与健康安全至关重要。

GB/T 5413.11-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 维生素B1的测定的基本信息

标准名：婴幼儿配方食品和乳粉 维生素B1的测定

标准号：GB/T 5413.11-1997

标准类别：国家标准(GB)

发布日期：1997-05-28

实施日期：1998-09-01

标准状态：现行

GB/T 5413.11-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 维生素B1的测定的简介

本标准规定了用荧光法和反相高压液相色谱法测定维生素B1的方法。本标准方法一适用于乳粉中维生素B1的测定方法；方法二适用于婴幼儿配方食品和乳粉中维生素B1的测定。GB/T5413.11-1997婴幼儿配方食品和乳粉维生素B1的测定GB/T5413.11-1997

GB/T 5413.11-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 维生素B1的测定的部分内容

GB/T5413.11~1997

本标准给出两种方法，方法一是荧光法，重现性好，准确度较高。方法二是高压液相色谱法，测定速度快。

本标准方法一为仲裁法

本系列标准从实施之日起，代替GB5413一85。本标准由中国轻工总会提出。

本标准由全国乳品标准化中心归口。本标准负责起草单位：国家乳制品质量监督检验中心、渐江省轻工业研究所。本标准参加起草单位：卫生部食品卫生监督检验所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀巢（中国）投资服务有限公司。

本标准主要起草人：李茂胜、任一平、黄百芬、郎昭斌、陈青俊、王芸。263.

中华人民共和国国家标准

婴幼儿配方食品和乳粉

维生素B的测定

Milk powder and formula foods for infant and young children-Determination of vitamin B, content1范围

本标准规定了用荧光法和反相高压液相色谱法测定维生素B,的方法。GB/T 5413. 11--1997

代替GB5413-85

本标准方法一适用于乳粉中维生素B的测定，方法二适用于婴幼儿配方食品和乳粉中维生素B的测定。

方法一　荧光法　

2方法原理

样品在稀盐酸溶液中消化，过滤，除去蛋白质等物质。如果样品中维生素B,系游离态，可直接在碱性铁氰化钾中氧化成噻嘧色素，在紫外光照射下发出荧光，其荧光强弱与噻嘧色素成正比；如果维生素B系结合态，则须经酶解转为游离态，层析除去杂质后再作荧光检测。检测所使用的激发波长E为365nm，发射波长Em为435nm。

3试剂

所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。3.1 盐酸:c(HCI)为 0. 1mol/L。3.2氢氧化钠：c(NaOH)为150g/L。3.3异丁醇：重蒸馏。

3.4乙酸钠：c(NaAc)为2mol/L

3.5酸性乙醇：体积分数为20%。用盐酸调节pH为3.5～4.3。3.6淀粉酶（生化试剂）溶液：100g/L3.7中性氟化钾：cKC1)为250g/L。250g氯化钾溶于1000mL水中。3.8酸性氟化钾：c(KCI)为250g/L。加8.5mL盐酸于1L中性氯化钾溶液中。3.9铁氰化钾：c[K.Fe(CN)。J为10g/L，使用当天配制。3.10氧化剂。

3.11标准溶液

3.11.1维生素B,标准贮备液，浓度为100μg/mL。准确称取50.0mg（在五氧化二磷干燥器内至恒量的)分析纯维生素B，盐酸盐，溶解于400mL左右体积分数为20%的酸性乙醇溶液（3.5）中，并定容于500mL棕色容量瓶中，于10℃左右贮存。取4毫升10g/L的铁氰化钾（3.9），用150g/L的氢氧化钠溶液（3.2）稀释至100mL，配好后置于暗国家技术监督局1997-05-28批准264

1998-09-01实施

处4h内使用。

GB/T 5413.11-1997

3. 11. 2维生素 B,标准工作液,浓度为 3μg/mL。吸取上述标准贮备液3mL，用0.1mol/L盐酸（3.1)稀释至100mL，每次实验须新鲜配制。3.12乙酸，体积分数为3%~5%。

将30mL冰乙酸用水稀释至1000mL。3.13活化人造沸石，40～60目，化学纯。沸石的活化：称取100g人造沸石于大烧杯中，加十倍体积的热乙酸（3.12），在搅动下煮沸15min，待澄清后弃去乙酸溶液，如此重复三次，再加五倍体积的热酸性氯化钾溶液（3.8），于搅拌下煮沸15min，待清后弃去氯化钾溶液，重复三次，然后再用热水洗至无氯离子存在，用布氏漏斗抽滤，于100℃烘箱干燥，保存于不漏气的广口瓶中。4仪器

常用实验室仪器及：

4.1荧光分光光度计。

5操作步骤

5.1抽提

于150mL三角瓶中准确称取3g左右样品，加盐酸（3.1）50mL，用铝箔纸盖住瓶口，在137.2～161.7kPa压力下（125℃）消化半小时，同时吸取5mL标准工作液（3.11.2）于150mL三角瓶中，加入约50mL盐酸（3.1），在137.2～161.7kPa压力（125℃）下消化半小时，冷却后，用乙酸钠（3.4）调pH值为4.5，然后加5mL酶溶液（3.6），在37℃条件下保温过夜，冷却后调节pH为3.5，于100mL容量瓶中加水定容，过滤。

5.2层析

5.2.1称2g左右经活化的人造沸石（3.13），湿法装柱。5.2.2吸取10mL滤液，通过沸石柱层析，流速控制在≤0.5mL/min，弃去滤液。5.2.3用近沸腾的蒸馏水洗涤沸石三次，每次5mL，再用70～80℃的酸性氯化钾（4.8）洗柱五次，每次4~~4.5mL，弃去初滤液1mL，集合滤液于25mL容量瓶中，冷却，用酸性氯化钾溶液（4.8）稀释至刻度。5.3氧化

在四支50mL的试管中，分别加入1.5g氯化钠或氯化钾固体及5mL标样（5.2.3），在其中二个试管中，立即加入3mL氧化剂（3.9），混勾，立即加入13mL异丁醇（3.3），猛烈振摇15s以上，静止分层，待荧光测定，另二管不加氧化剂，以3mL的氢氧化钠（3.2)代替，作为空白。同时吸取样液5mL（5.2.3)于另四支试管中，作法同上。5.4荧光测定

从每一试管中吸上层清液作荧光测定。6分析结果的表述

样品中维生素B(mg/100g）=（=1.)×m×1000(I, - ) ×c× 5

式中：1.---—样品荧光值；

I——样品空白荧光值；

Iad~—标样荧光值;

I.—标样空白荧光值；

c—--标样浓度，μg /mL;

7允许差

样品的质量，g。

GB/T 5413.11-1997

同一样品的两次测定值之差不得超过两次测定平均值的5%。方法二反相高压液相色谱法

8方法提要

样品在稀盐酸环境中高温水解、酶解，样液用碱性铁氰化钾衍生，正丁烷萃取后，经ODSCts反相色谱柱分离，在荧光检测器（E：375nm，Em：435nm）条件下检测，用外标法定量维生素B的含量。9试剂

9. 1 正丁醇。

9.2铁氰化钾。

9.3浓盐酸。

9.4无水乙酸钠。

9.5 冰乙酸。

9.6甲醇：色谱纯。

9.7硫胺素（维生素B):标准品。9.8铁氰化钾溶液：c[K，Fe(CN)。J为10g/L。称取2g铁化钾，溶解并稀释至200mL。9.9氨氧化钠溶液：c（NaOH)为100g/L。称取20g氢氧化钠固体，溶解并稀释至200mL9.10碱性铁氰化钾溶液：10g/L铁氰化钾溶液（9.8）5mL与100g/L氢氧化钠溶液（9.9）200mL混合。9.11盐酸溶液：c(HCl)为0.1mol/L。吸取4.5mL浓盐酸，溶于500mL去离子水。9.12盐酸溶液：c(HCl)为0.01mol/L。吸上述0.1mol/L盐酸溶液50mL配制成500mL。9.13乙酸钠溶液（pH=4.5)：c(NaAc)为0.05mol/L。称取4.10g乙酸钠固体，配成1000mL，并用冰乙酸调至 pH= 4. 5。

9.14乙酸钠溶液：c(NaAc）为2.0mol/L。称取16.61g乙酸钠，配制成100mL。9.15混合酶溶液，30g/L。称取淀粉酶和木瓜酶各3.6g，溶于100mL2mol/L乙酸钠溶液。9.16流动相配制：用0.05mol/L乙酸钠溶液与甲醇按适当比例混合。9.17标准溶液

9.17.1维生素B,标准储备溶液，浓度为500μg/mL。精确称取0.0500g维生素B,（9.7），用0.01mol/L盐酸（9.11)溶解并定容于100mL容量瓶中，放冰箱中保存。

9.17.2维生素B,标准工作液，浓度为0.5μg/mL。将标准储备液用重蒸水稀释1000倍，所得溶液经0.3um滤膜过滤。10仪器

10.1高效液相色谱仪或具同等性能的高效液相色谱仪。10.2荧光分光仪（带9L流动池)或具波长可调功能的等同性能荧光检测器。10.3C18反相色谱柱（dp5um，25cm×4.6mm）或具同等性能的色谱柱。10.4组织捣碎机（10000~12000r/min）。10.5高压杀菌锅。

11操作步骤

11.1样品处理

GB/T 5413.11—1997

11.1.1称样：将样品放入捣碎机中捣碎后，精确称取5.0～10.0g（内含维生素B,5μg以上）于三角瓶中。

11.1.2水解：加适量的盐酸溶液（9.11)，控制样液中酸浓度在0.1mol/L左右，将三角瓶内的样液摇匀后，放入高压杀菌锅内，在121℃下保持30min，待冷却后取出，轻摇数次。11.1.3酶解：冷却至40℃以下，分别加入2.5mL混合酶液（9.15），摇匀后，置于37℃的培养箱中过夜。

11.1.4定容：用0.1mol/L氢氧化钠溶液调pH值至6.0左右，再用二次重蒸水定容至100mL。11.1.5过滤：样液经定量滤纸过滤。11.1.6衍生：取滤液10.00mL（11.1.5）于25mL带塞量筒中，加入5mL碱性铁氰化钾（9.10）氧化后，充分混匀后再加10.00mL正丁醇（9.1)萃取，经强烈摇动，静止分层后吸取正丁醇相（上层）进样。11.2样品测定

11.2.1色谱条件

流动相：0.05mol/L乙酸钠溶液（9.13）：甲醇（9.6)（65：35，体积比）。流速：1.00 mL/min。

检测波长：激发波长375nm，发射波长435nm。进样量：20μL。

12分析结果的表述

样品中维生素B,的含量(mg/100g）=C×FXVX100m X 1000

式中：c——进样样液的浓度，μg/mL；F-—稀释倍数;

V——定容容积,mL;

m—样品的质量，g。

13允许差

13.1重复性

同一样品两次测定结果之差不得超过平均值的5%。13.2重现性

同一样品在两个不同实验室测定结果之差不得超过平均值的5%。267

（2）

北检院检验检测中心能够参考《GB/T 5413.11-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 维生素B1的测定》中的检验检测项目，对规范内及相关产品的技术要求及各项指标进行分析测试。并出具检测报告。

检测范围包含《GB/T 5413.11-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 维生素B1的测定》中适用范围中的所有样品。

测试项目

按照标准中给出的实验方法及实验方案、对需要检测的项目进行检验测试，检测项目包含《GB/T 5413.11-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 维生素B1的测定》中规定的所有项目，以及出厂检验、型式检验等。

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检测流程

线上咨询或者拨打咨询电话;

获取样品信息和检测项目;

支付检测费用并签署委托书;

开展实验，获取相关数据资料;

出具检测报告。

北检研究院的服务范围

1、指标检测：按国标、行标及其他规范方法检测

2、仪器共享：按仪器规范或用户提供的规范检测

3、主成分分析：对含量高的组分或你所规定的某种组分进行5~7天检测。

4，样品前处理：对产品进行预处理后，进行样品前处理，包括样品的采集与保存，样品的提取与分离，样品的鉴定以及样品的初步分析，通过逆向剖析确定原料化学名称及含量等共10个步骤;

5、深度分析：根据成分分析对采购的原料标准品做准确的定性定量检测，然后给出参考工艺及原料的推荐。最后对产品的质量控制及生产过程中出现问题及时解决。